【摘 要】
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目的:1、研究人肺腺癌组织及人肺腺癌细胞中DNAJB1蛋白的表达情况;2、探讨DNAJB1蛋白对人肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力产生的影响,同时探索其相关信号通路机制,以期对人
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目的:1、研究人肺腺癌组织及人肺腺癌细胞中DNAJB1蛋白的表达情况;2、探讨DNAJB1蛋白对人肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力产生的影响,同时探索其相关信号通路机制,以期对人肺腺癌的早期诊断和治疗提供一定参考。方法:1、将手术切除的人肺腺癌组织和癌旁组织进行组织包埋取石蜡切片后进行免疫组织化学实验检测分析人肺腺癌组织与癌旁组织中DNAJB1的差异表达情况。使用Western blot实验检测A549、H1299、H292肺腺癌细胞株和Bease-2B正常肺上皮细胞株中的DNAJB1蛋白表达差异情况,以确定DNAJB1高表达的细胞株。2、使用慢病毒p Magic 7.1-DNAJB1-KD转染DNAJB1高表达的肺腺癌细胞株以构建DNAJB1稳定下调表达的细胞模型,细胞模型成功构建后对其进行CCK-8细胞增殖实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验、细胞划痕实验、用以研究DNAJB1与人肺腺癌细胞增殖、侵袭及迁移之间的相互关系。3使用Western Blot实验初步研究其可能参与的相关信号通路。结果:1、免疫组织化学结果显示人肺腺癌组织中DNAJB1蛋白的表达量明显高于癌旁组织中DNAJB1的表达量。对肺腺癌细胞株行全蛋白提取后使用Western Blot实验结果提示DNAJB1蛋白在A549细胞株中的表达明显高于在H1299、H292、Bease-2B细胞株中的表达。最终选择对A549细胞株进行慢病毒转染从而构建DNAJB1低表达模型。2、成功构建DNAJB1低表达的A549稳定细胞株。CCK-8细胞增殖实验的结果表明DNAJB1能促进人肺腺癌细胞的增殖能力,P<0.05差异具有统计学意义。Transwell侵袭实验结果显示,相对于转染阴性对照慢病毒的细胞,转染48h后,实验组穿膜细胞数低于对照组[(83.50±22.16)vs(183.25±54.93)个,P<0.05];Transwell迁移实验显示,24h后,实验组穿膜细胞数低于对照组[(103.25±19.52)vs(215±19.90)个,P<0.05],提示下调DNAJB1可降低A549细胞侵袭及迁移能力;通过细胞划痕实验结果发现,与阴性对照组细胞相比,DNAJB1表达下调细胞株的迁移能力明显减弱,此结果差异具有统计学意义(P<0.05)。以上实验结果均提示DNAJB1对人肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力具有促进作用。3、通过Western Blot实验检测显示,与阴性对照组细胞株相比,DNAJB1下调表达的细胞株中IQGAP1、p-ERK1/2的表达量明显下降,这提示DNAJB1可能通过IQGAP1影响Ras/Raf/MEK/ERK信号通路从而促进人肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力。另外,由Western Blot实验结果可知,DNAJB1下调表达的细胞株中DVL2、β-catenin的表达量明显下降,而E-cadherin表达量明显上调,这提示DNAJB1也可能通过DVL2影响Wnt信号通路进而对人肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力产生影响。结论:1、DNAJB1蛋白在人肺腺癌组织中的的表达量明显高于在癌旁组织中的表达量。DNAJB1在人肺腺癌细胞株A549中呈高表达,而在人正常肺上皮细胞Bease-2B中呈低表达。2、体外细胞实验表明,DNAJB1影响肺腺癌细胞的增殖,同时DNAJB1与肺腺癌的侵袭及迁移呈正相关。另外,通过相关分子机制信号通路蛋白的初步研究发现DNAJB1可通过调节IQGAP1影响Ras/Raf/MEK/ERK信号通路,或者也可通过DVL2蛋白影响Wnt信号通路参与肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移过程。
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