【摘 要】
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本研究应用现代分子生物技术,以1日龄SPF雏鸡为研究对象,利用被网状内皮组织增生病病毒感染雏鸡的cDNA为模板,选取相对保守的LTR序列,设计并合成出特异性引物,建立了RT-PCR检
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本研究应用现代分子生物技术,以1日龄SPF雏鸡为研究对象,利用被网状内皮组织增生病病毒感染雏鸡的cDNA为模板,选取相对保守的LTR序列,设计并合成出特异性引物,建立了RT-PCR检测方法,并对该检测方法进行优化。在此基础上,又结合生物学检测技术,对试验中感染REV的SPF雏鸡心脏、脾脏、肝脏、肺脏、肾脏、胸腺和法氏囊进行检测,同时又对来自东北某省养殖场选取的50份现地临诊血液样品进行检测。本实验旨在建立REV的快速、高效检测方法,为日后疾病的防治提供重要的科学基础和依据。主要研究结果如下:(1)成功建立了检测网状内皮组织增生病病毒的RT-PCR方法,该检测方法能够有效地扩增出目的片段,可在4个小时内完成对样品的检测;(2)该检测方法的最佳优化条件为:退火温度53℃、引物浓度为0.3μmol/L、Mg2浓度为2.5μmol/L;(3)该方法敏感性高,能特异性检测REV样品。对样品的反复多次检测,检测结果高度一致,该方法具有较高的重复性和稳定性;(4)应用上述建立的RT-PCR检测方法,对试验中感染REV的SPF雏鸡的各个主要器官进行检测,结果表明SPF雏鸡各个主要器官均受到感染。对东北某省50份现地临诊血液样品进行检测,结果显示,阳性率高达92%。
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