猪卵母细胞体外成熟及其电激活的研究

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本实验探讨了生长因子和激素对猪卵母细胞体外成熟的影响,以期完善和优化猪卵母细胞体外成熟系统,同时对猪卵母细胞电激活的参数进行了初步研究。 1.探讨了胰岛素类生长因子(IGF-Ⅰ)对猪卵母细胞体外成熟的影响。在成熟液中添加10ng/ml的IGF-Ⅰ显著提高猪卵母细胞的第一极体排出率(65.5%vs43.3%,P<0.05),且显著提高卵母细胞孤雌激活后的囊胚发育率(10.6%vs3.8%,P<0.05),但卵母细胞激活后的分裂率与对照组相比无显著差异。 2.研究了上皮细胞生长因子(EGF)对猪卵母细胞体外成熟的影响。在成熟液中添加EGF显著提高卵母细胞的第一极体排出率(P<0.05),其中添加50ng/ml EGF的效果最好,第一极体排出率达66.9%,且卵母细胞孤雌激活后的囊胚率(30.3%)显著高于对照组(19.2%,P<0.05)。 3.探讨了激素种类对猪卵母细胞体外成熟的影响。结果发现,成熟液中添加促卵泡素(FSH)组的卵裂率(74.3%)低于人绝经促性腺激素(hMG)组(78.6%,P<0.05),但是第一极体排出率和孤雌激活后的囊胚率都显著高于hMG组(P<0.05)。 4.研究了电激活参数对猪卵母细胞孤雌发育的影响。脉冲强度为80v/mm的电激活效果最好,其囊胚发育率(15.1%)显著高于70v/mm(9.8%)和90v/mm(3.6%)。脉冲时间为30μs和50μs的猪卵母细胞激活分裂率(77.6%vs73.8%)和囊胚发育率(11.8%vs11.7%)无显著差异(P>0.05),但两者均显著高于70μs组(61.5%和5.8%,P<0.05)。以上结果表明:(1)IGF-Ⅰ和EGF对猪卵母细胞的体外成熟均有促进作用,其添加的适宜浓度分别为10ng/ml与50ng/ml;(2)添加FSH的猪卵母细胞成熟培养效果优于hMG;(3)猪卵母细胞的适宜电激活参数为:80v/mm,30μs—50μs。
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