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[目的]:研究内源性甲状旁腺激素(PTH)缺乏对于体外诱导培养破骨细胞的影响,探索内源性甲状旁腺激素(PTH)在骨折愈合中对于破骨细胞的影响及其机制。[方法]:选用8周龄PTH+/+和PTH-/-小鼠各16只,采用髓内针固定建立小鼠中断股骨骨折模型。分别于骨折后第7天、14天取小鼠骨折造模股骨,按标准程序对于小鼠股骨进行脱钙、脱水、包埋、切片处理。通过免疫组织化学染色分析骨折部位组织蛋白酶K(CK)及核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的表达,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色分析破骨细胞活性。并提取骨痂组织的总RNA和总蛋白,通过Western blot和RT-PCR的方法分析破骨细胞相关基因和蛋白表达水平。取8周龄PTH+/+和PTH-/-小鼠各16只,分离培养小鼠股骨全骨髓细胞接种于培养皿中,加入10ng/ml巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)培养24h,收集未贴壁细胞,即得破骨细胞前体。将分离所得前体细胞接种于含有玻片及皮质骨片的培养皿中培养,利用M-CSF和RANKL刺激形成破骨细胞。根据加入不同RANKL浓度分为低浓度(50ng/ml)和高浓度(100ng/ml)组。于诱导第6天,第9天进行TRAP染色,观察破骨细胞形态并计数40或100倍视野内TRAP阳性细胞数量。在电镜下观察皮质骨片骨吸收陷窝。取8周龄PTH+/+和PTH-/-小鼠各16只,体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,取诱导7天细胞,提取总蛋白和总RNA,Westren blot及RT-PCR检测成骨细胞RANKL表达水平。[结果]:PTH+/+组骨痂蛋白和RNA中,RANKL与CK表达均较PTH-/-组高。免疫组织化学染色显示,骨折愈合一周及两周PTH+/+组的RANKL表达均高于PTH-/-组,并且PTH+/+组的CK表达及TRAP活性也分别高于PTH-/-组。体外诱导培养破骨细胞结果显示,在相同浓度M-CSF和RANKL刺激下,PTH+/+和PTH-/-组破骨细胞数量及骨吸收陷窝面积未见统计学差异,但是高浓度的RANKL能促进破骨细胞数量增加并且增加骨吸收陷窝面积。体外培养间充质干细胞诱导成骨细胞显示,诱导成骨细胞过程中,PTH+/+组成骨细胞表达RANKL蛋白及mRNA均高于PTH_/-组。[结论]:内源性PTH缺乏能降低体外成骨细胞RANKL表达。内源性PTH缺乏对于体外诱导培养破骨细胞的数量及功能没有影响,但是增加RANKL浓度能促进破骨细胞数量和骨吸收功能增加。骨折愈合过程中,PTH缺乏降低RANKL表达,影响破骨细胞活性。