【摘 要】
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实验目的 半月板软骨缺损的治疗一直是困扰医学界的一大难题。目前的主要治疗手段是行半月板切除术和部分切除术,远期常并发膝关节退行性变。随着组织工程的发展,试图用组织
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实验目的 半月板软骨缺损的治疗一直是困扰医学界的一大难题。目前的主要治疗手段是行半月板切除术和部分切除术,远期常并发膝关节退行性变。随着组织工程的发展,试图用组织工程化的半月板来修复损伤。三维支架与种子细胞是组织工程的重要因素。本实验在前人的基础上,对半月板软骨进行脱细胞处理,制备支架,并与骨髓基质干细胞进行联合培养研究,以期将来可以实现组织工程化膝关节的制造。 实验材料与方法 1.骨髓基质干细胞的培养 取日本大耳白兔一只（雌雄不限）麻醉后在股骨上部干骺端钻孔,抽取骨髓,无菌接种到培养瓶中。加入含胎牛血清的低糖DMEM培养基培养。传至第三代作为种子细胞。 2.猪半月板软骨脱细胞支架的制备 取猪（三月龄）半月板和膝关节软骨修整成1×1cm大小的片状,用Tris-HCI（PH7.4）缓冲液和TritonX-100脱细胞,将制备的脱细胞软骨片放人内含Tris-HCl（PH7.4）缓冲液中,4℃下保存备用。 3.兔骨髓基质干细胞与猪半月板软骨脱细胞支架联合培养 无菌条件下,收集第三代骨髓基质干细胞,以反复滴定法将细胞种植于半月板软骨脱细胞支架中,在37℃,5%CO2,饱和湿度条件下联合培养,其后隔日换液。培养7天后观察。 4.组织学检查 培养至第三代细胞长满瓶底后,用PBS冲洗三遍,换用无血清培养基培养三天,取培养液进行细胞培养液明胶酶谱分析,用无血清培养液作对
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