论文部分内容阅读
目的:使用脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导建立神经炎症模型,类固醇受体辅助激活因子-1（steroid receptorcoactivator-1,SRC-1）抑制剂（Dasatinib）抑制 SRC-1 表达,SRC-1 激动剂（MCB-613）刺激 SRC-1的表达,检测神经炎症性认知障碍小鼠在水迷宫中逃避潜伏期、穿越平台次数变化以及海马区脑组织中炎症因子的浓度变化,海马区神经损伤的变化,小胶质细胞与SRC-1共表达的关系,脑组织中磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶 B（phosphatidylinositol 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT）信号通路中AKT蛋白和突触素（Synaptophysin,SYN）蛋白表达的变化,探讨SRC-1通过PI3K/AKT信号通路介导突触可塑性在神经炎症诱导的认知障碍小鼠中的作用及其机制,旨在为与神经炎症相关的认知功能障碍的发病机制提供更加丰富的理论基础。方法:将64只成年雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:空白对照组（n=1 6）,炎症模型组（n=1 6）,SRC-1 抑制组（n=1 6）,SRC-1 激动组（n=1 6）。通过脑立体定位技术给予除空白对照组外的各组注射LPS（5mg/kg）,空白对照组注射等体积生理盐水。术后第1-4天通过灌胃给予干预药物,SRC-1抑制组给予SRC-1抑制剂Dasatinib（20mg/kg）抑制SRC-1表达,SRC-1激动组给予MCB-613（20mg/kg）刺激SRC-1表达。每组随机选取4只小鼠从第4天至9天开始行莫里斯（Morris）水迷宫行为学实验,其余小鼠处死后取脑组织行相关实验室检测:酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测炎症因子肿瘤坏死因子-α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）、白介素 1β（Interleukin 1β,IL-1 β）的含量;苏木素-伊红（Hematoxylin-eosin,HE）染色观察神经细胞元细胞损伤情况;蛋白质印迹（Western Blot,WB）检测SRC-1、蛋白激酶 B（protein kinase B,AKT）、磷酸化蛋白激酶 B（p-protein kinase B,p-AKT）、SYN蛋白含量;免疫荧光染色观察SRC-1、小胶质细胞选择性标记物钙结合蛋白 1（ionized calcium-binding adaptor molecule 1,Iba-1）)共表达情况。采用SPSS25.0行数据分析,以P＜0.05具有统计学意义。结果:1.调控SRC-1对小鼠空间逃避潜伏期的影响:①不同组小鼠在Morris水迷宫巡航实验中逃避潜伏期随训练时间逐渐缩短。②巡航实验第4天,与空白对照组相比,神经炎症组逃避潜伏期明显延长（P＜0.05）,SRC-1抑制组逃避潜伏期显著延长（P＜0.01）。③SRC-1激动组比SRC-1抑制组逃避潜伏期显著延长（P＜0.01）。④巡航实验第5天,与神经炎症组相比,SRC-1激动组逃避潜伏期显著缩短（P＜0.01）。2.调控SRC-1对小鼠穿越平台次数的影响:①与神经炎症组相比,SRC-1激动组穿越平台次数显著增多（P＜0.01）。②与SRC-1抑制组相比,SRC-1激动组平台穿越次数显著减少（P＜0.01）。3.调控SRC-1对小鼠目标象限滞留时间的影响:结果显示,与空白对照组相比,神经炎症组目标象限滞留时间明显缩短（P＜0.05）,差异有统计学意义。方差分析结果提示,各组组间无明显差异（F=1.364,P＞0.05）,组间差异无统计学意义。4.调控SRC-1对小鼠海马区病理学改变的影响:①空白对照组小鼠CA1（Cornu Ammonis 1 Filed）区脑组织切片神经元细胞膜完整,排列整齐,结构清晰。②神经炎症组、SRC-1抑制组、SRC-1激动组小鼠海马组织切片中可见不同程度神经细胞变性、坏死,结构紊乱、炎细胞浸润,出现空泡状细胞、核仁溶解。③与神经炎症组相比,SRC-1抑制组的CA1区神经元细胞排列混乱,结构不完整,炎细胞浸润明显增多,核仁明显溶解。④与神经炎症组相比,SRC-1激动组神经细胞变性、坏死、炎细胞浸润减少,结构紊乱减轻。5.调控SRC-1对小鼠IL-1 β表达的影响:①与空白对照组相比,神经炎症组小鼠海马表达的IL-1 β显著升高（P＜0.01）。②与神经炎症组相比,SRC-1抑制组的IL-1 β显著升高（P＜0.05）。③与神经炎症组相比,SRC-1激动组的IL-1 β显著降低（P＜0.05）。6.调控SRC-1对小鼠TNF-α表达的影响:①与空白对照组相比,神经炎症组小鼠海马表达的TNF-α显著升高（P＜0.05）。②与神经炎症组相比,SRC-1抑制组的TNF-α显著升高（P＜0.05）。③SRC-1激动组的TNF-α 显著降低（P＜0.05）。7.调控SRC-1各组小鼠海马区脑组织AKT、p-AKT、SYN蛋白表达的变化:①与空白对照组相比,神经炎症组中海马组织中SRC-1、p-AKT蛋白水平明显降低（P＜0.05）、SYN蛋白表达显著降低（P＜0.01）。②与神经炎症组相比,SRC-1抑制组中SRC-1、p-AKT、SYN蛋白水平明显降低（P＜0.05）。③与神经炎症组相比,SRC-1激动组中SRC-1、p-AKT、SYN蛋白水平明显升高（P＜0.05）。④AKT蛋白表达无明显差异（P＞0.05）。8.SRC-1与小胶质细胞特异性标志物IBA-1阳性细胞的关系:①SRC-1与小胶质细胞（Iba-1 阳性细胞）存在一定程度的共表达情况.②SRC-1与神经元细胞（GAPDH阳性细胞）存在一定程度的共表达关系。结论:SRC-1可能通过抑制炎症反应、保护神经损伤,上调PI3K/AKT通路中AKT蛋白的磷酸化水平,刺激SYN的表达,改善突触可塑性,改善认知功能障碍。