荔枝果实LcSnRK1a功能分析及其互作蛋白的筛选

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荔枝,原产于我国华南地区,果实色泽鲜艳,风味独特,营养丰富,因而具有很高的经济价值。然而,荔枝采摘后很快腐败褐变,不耐贮运,严重阻碍荔枝产业发展。蔗糖非发酵1型相关蛋白激酶(SnRK)是植物体内重要的能量调节器,参与体内多种信号途径的转导,对植物的能量代谢、生长发育、成熟衰老和抗逆生理起到重要的调控作用。本研究以LcSnRK1a为研究核心,通过酵母双杂交筛选荔枝cDNA文库,最终筛选出与LcSnRK1a存在互作关系的蛋白,LcFBC、LcWRKY28-1、LcBKI1,并对三个蛋白的生物信息学进行分析及预测。本研究的主要结果如下:  1.对LcSnRK1a基因进行了生物信息学分析,预测LcSnRK1a基因编码的蛋白具有稳定的结构;亚细胞定位预测显示LcSnRK1a基因定位于细胞质;通过构建进化树分析显示LcSnRK1a与AtAKIN10和AtAKIN11具有较高的同源性。  2.构建了LcSnRK1a的pSAT6-EYFP-N1融合表达载体,对LcSnRK1a进行了亚细胞定位实验,结果显示LcSnRK1a定位于细胞核中。  3.构建了荔枝酵母双杂交cDNA文库和LcSnRK1a的pGBKT7融合表达载体,进行了文库筛选,得到与LcSnRK1a存在互作关系的LcFBC、LcWRKY28-1、LcBKI1。通过搜索荔枝基因组数据,得到目标互作蛋白基因的序列信息,设计特异引物克隆得到LcFBC全长CDS(1077 bp),编码359个氨基酸。同时进行了生物信息学分析,预测LcFBC定位于细胞质中,与AtFBA5和AtFBA7具有较高的同源性,而AtFBA5和AtFBA7在响应各种激素和逆境胁迫中具有重要作用,推测LcFBC也存在类似功能。
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