HGF基因治疗乙酸诱导溃疡性结肠炎大鼠实验研究

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目的:评价携带肝细胞生长因子(HGF)基因的减毒沙门氏菌对大鼠溃疡性结肠炎模型的治疗作用. 方法:第一部分乙酸诱导建立40只Wistar大鼠溃疡性结肠炎模型,并随机分成四组:TypL-HGF治疗组(A组),TypL-GFP治疗组(B组),Ty治疗组(C组)模型对照组(D组),另设一组正常对照组(E组),每组10只。造摸后第3d开始灌肠治疗,A组给予1×109cfu Typl-HGF治疗,B组给予同剂量聊Typl-GFP治疗,C组给予同剂量Ty治疗,D、E组分别给予同体积的生理盐水灌肠,每3d一次,共3次。各组大鼠于造模后第12d断头处死,取结肠病变部位组织行常规HE染色,观察各实验组结肠的病理变化,并收集全血及血清,流式细胞仪检测全血中CD4+,CD8+T细胞含量,放免法检测血清中IL-2、IL-6、TNF-a水平的变化。 第二部分用免疫组化法检测各组HGF及c-Met基因的表达;荧光显微镜观察GFP基因在B组大鼠各脏器的表达;PCR法检测A组大鼠心、肝、脾、肾、胃、大肠等组织中CMV的表达。 结果: 1.肉眼观察可见B、C、D组大鼠肠管不同程度变粗,肠壁变薄,肠壁外周粘连严重,黏膜溃疡、糜烂严重,A组大鼠上述病变明显改善(P<0.01);光镜下可见B、C、D组大鼠结肠溃疡形成较多,黏膜糜烂缺失严重,腺体破坏,坏死组织多见,黏膜肌层破坏,浆膜充血水肿,A组大鼠结肠溃疡数较B、C、D组减少,黏膜糜烂缺失程度轻,溃疡边可见新生肉芽组织增生,有的甚至黏膜已修复(P<0.05)。全血中CO4+/CD8+比值及血清IL-2、IL-6、TNF-a水平A组明显低于C,D组(P<0.05)。 2.免疫组化显示:A组大鼠结肠组织中HGF及c-Met基因的表达均强于其他组。 3.B组大鼠的肝脏,脾脏,肾脏,大肠,小肠中均可检测到绿色荧光蛋白的表达。 4.A组大鼠心、肝、脾、肾、胃、大肠等组织提取DNA中可扩增出CMV片段。 结论:1减毒沙门氏菌可以将HGF基因携带入大鼠体内表达。 2减毒沙门氏菌介导的HGF基因对大鼠溃疡性结肠炎有治疗作用。
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