猪GSK3β蛋白对Il-10、Il-12和GYS1基因表达的调控研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:itsmoreaaron
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
糖原合成酶激酶3(GSK3)是一种广泛存在于哺乳动物中的丝氨酸/苏氨酸类激酶,其作用的底物高达100多种,参与众多的信号通路并在其中发挥重要的功能。在哺乳动物中GSK3存在GSK3α和GSK3β两种亚型,它们虽然在结构上具有非常高的同源性,但是其功能却是不尽相同的。本研究目的在于探究猪GSK3β蛋白及其不同亚型在炎症反应的作用以及对其直接作用底物糖原合成酶(GS)的转录调控研究,为进一步研究GSK3β基因在猪的抗病育种以及肌肉糖原代谢中的作用提供一定的理论基础。主要结果如下:  (1)用LPS诱导猪肾细胞系(PK-15),使其产生炎症反应,或用GSK3β抑制剂LiCl处理细胞,利用Western blot检测GSK3β的磷酸化程度,进而检测其活性变化。结果表明:LPS处理、LiCl处理以及LiCl/LPS共同处理能通过升高PK-15细胞中的GSK3β(ser9)的磷酸化程度从而降低其GSK3β蛋白的活性;  (2)利用ELISA技术检测LPS刺激细胞以及先用LiCl处理再用LPS诱导细胞后的细胞培养液中的IL-10和IL-12含量。结果表明:LPS处理极显著增加细胞分泌到培养液中的IL-10和IL-12量(P<0.01);而使用GSK3β活性抑制剂即LiCl预先处理细胞后再用LPS诱导细胞组的IL-10和IL-12表达量较空白组有显著的增加(P<0.05),但较LPS处理组又有显著的降低(P<0.05),表明GSK3β参与了由LPS诱导的PK-15细胞对IL-10和IL-12的分泌;  (3)利用qPCR检测LPS诱导后GSK3β的5种亚型的mRNA的相对表达量。结果发现LPS处理细胞能引起GSK3β基因5种亚型mRNA表达水平的变化。其中GSK3β2在15,30,60和120 min呈现显著地下降(P<0.01); GSK3β5在30,60和120 min呈现显著地下降(P<0.05); GSK3β3在15,30 min有一个短暂的显著上升(P<0.05)。这个结果说明,GSK3β基因5种亚型可能对由LPS诱导细胞的IL-10和IL-12分泌具有不同的调节作用;  (4)表达GSK3β的4种亚型后,用LPS诱导细胞并用ELISA技术检测细胞培养液中的IL-10和IL-12含量。结果发现细胞分泌到培养液中的IL-10和IL-12量均出现显著增加(P<0.05)。其中GSK3β1的促进作用最为强烈,GSK3β3次之,GSK3β2和GSK3β5相对最弱;  (5)利用qPCR检测不同时间的IGF-1处理下的GYS1和GYS2基因的表达模式。在外源添加物胰岛素样生长因子(IGF-1)的刺激下,GYS1的mRNA水平表达出现显著的上调变化而GYS2的mRNA水平的表达量没有显著变化;进一步发现在细胞中过表达GSK3β后,GYS1的mRNA表达水平出现极显著的下降,说明GSK3β影响GYS1的转录水平表达;  (6)用双荧光素酶报告系统检测构建的GYS1的启动子片段活性以及GSK3β共转染GYS1的5个启动子片段后的其启动子的活性。结果发现,当其5个启动子片段单独转染后的相对荧光值较pGL3-basic有显著的提高(P<0.05),其中片段+224/-350的活性显著高于+224-/147片段和+224-/539片段(P<0.05);而GSK3β与GYS1的5个启动子片段共转染后,pGL3-350/+224,pGL3-961/+224,pGL3-1488/+224这三个片段的启动子相对荧光值显著降低(P<0.05),说明在GYS1基因的-147至-350,-350到-539以及-539至-961片段之间存在转录因子结合位点,且这些转录因子能被GSK3β调控。
其他文献
电视娱乐传播的流行已成为世界性风潮,而过度的娱乐化也遮蔽了电视的文化认知功能、教育功能和审美功能。中国电视娱乐节目经过10余年的发展渐成规模,但某种程度上也渐渐走进
本论文从北京地区夏季气候的角度研究高温对热应激奶牛的体温调节、生产性能和血液生化指标的影响,并采取喷雾吹风和淋水吹风的降温方法,为该地区适宜的降温方法和降温自动化系
Although recent diagnostic and therapeutic advances have substantially improved the survival of patients with gastric cancer(GC), the overall prognosis is still
作为一个经济欠发达的内陆省份,湖南虽环境闭塞,民风古朴,但近代以来,湖南却人文鼎盛,人才辈出,“惟楚有才,于斯为盛”,这不仅得益于富于求仁履实、思变求新的湖湘文化的浸淫
本文以牛卵母细胞为研究模型,旨在建立一套哺乳动物卵母细胞简易高效实用的冷冻保存技术体系,以期为现代胚胎生物技术研究提供基础材料保障,为珍稀和濒危种质资源保存“卵子库”
目的了解辽宁地区女职工宫颈细胞学异常情况。方法采用宫颈细胞涂片及TBS分类筛查1770例已婚妇女的宫颈脱落细胞,按照年龄不同分为20~29岁组(141例)、30~39岁组(587例)、40~4
本文在对2001-2005年农村相关统计数据进行分析比较后,提出尽快提高农村劳动力素质是解决“三农问题”难题的关键,也就是要在政府的关注和干预下,振兴“农村职业教育”,大胆
分别采用外周血淋巴细胞培养法、胰酶处理法、氢氧化钡处理法对3个地方鸡种(萧山鸡、北京油鸡和狼山鸡)的核型及G带和C带进行分析,研究结果表明: ① 外周血淋巴细胞培养法适
本研究以青海湖裸鲤为研究对象,研究了青海湖裸鲤成鱼消化酶的活性,青海湖裸鲤幼鱼蛋白质和能量的需要量,论文包括以下三个方面的内容:1.本实验以青海湖裸鲤成鱼(体重:300g左