【摘 要】
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构建了包含双向CaMV35S启动子的双元RNAi载体，每个方向的CaMV35S启动子都有对应的nos终止子序列。在两个CaMV35S启动子之间插入了一段Kan序列，并且通过Kan序列引入了SapI的酶切
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构建了包含双向CaMV35S启动子的双元RNAi载体，每个方向的CaMV35S启动子都有对应的nos终止子序列。在两个CaMV35S启动子之间插入了一段Kan序列，并且通过Kan序列引入了SapI的酶切位点，外源基因序列可以通过SapI克隆到双向启动子之间。用Sau3AI部分酶切拟南芥基因组DNA并回收片段，通过T4DNA聚合酶的作用在回收片段的3'端各补一个G，处理后的DNA片段就可以连接到双向启动子之间，从而构建RNAi文库。
通过农杆菌介导的转化，将GUS基因导入拟南芥，然后经过潮霉素的筛选、GUS活性检测后，筛选到了能表达GUS基因的植株。经过两代筛选，得到能稳定表达GUS的拟南芥纯系。将GUS的序列片段克隆到双向CaMV35S启动子之间，用NPTII作为抗性筛选标记、gfp为报告基因，构建得到GUS的双元RNAi载体pCAMBIA1301-gfp-GUSi-NPTII。将该载体转入农杆菌，然后用重组农杆菌感染能稳定表达GUS的拟南芥。同时用不带有RNAi表达单元的质粒pCAMBIA1301-gfp-NPTII通过农杆菌介导转化另一批能表达GUS的拟南芥作为对照。收获种子后，通过潮霉素和卡那霉素筛选，得到了转化植株。
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