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目的:观察穴位注射草分枝杆菌与中药穴位贴敷对支气管哮喘大鼠血清免疫球蛋白E(Ig E)水平、肺组织白介素10(IL-10)、白介素17(IL-17)、细胞粘附因子1(ICAM-1)表达的影响,探讨穴位注射、穴位贴敷中医外治法对支气管哮喘的作用机制,为中医外治法治疗支气管哮喘的临床应用提供有力依据及参考。方法:SPF级Wistar雄性大鼠60只适应性喂养一周,随机分为对照组、模型组、草分枝杆菌穴位注射组(穴注组)、中药贴敷组(贴敷组)、和穴位注射联合中药贴敷组(穴注+贴敷组),每组12只。复制卵蛋白(OVA)大鼠哮喘模型,分为致敏阶段与激发阶段进行。除对照组,其余大鼠分别于第1天、第8天腹腔注射OVA、氢氧化铝混悬溶液(10%的OVA及10%的氢氧化铝)1ml致敏,对照组注射同量的生理盐水。第15天,各组均给予密闭雾化,大鼠置于密闭雾化箱中,以2%OVA溶液超声雾化激发,对照组以生理盐水代替,每天一次,每次30min;相比对照组观察雾化时各组大鼠行为变化,出现烦躁、搔鼻、咳嗽、呼吸频率加快且幅度加大、明显的腹式呼吸、点头呼吸,甚至四肢瘫软俯伏不动、大小便失禁等现象视为激发成功。连续激发7天,后改为每周激发2次。连续激发哮喘发作7天后,对照组正常喂养,其余各组进行治疗。取穴大椎、双定喘、双肺俞、双脾俞、双肾俞,穴注组行草分枝杆菌穴位注射,五组穴位每日轮流取穴注射;贴敷组行贴敷2号穴位贴敷,每贴6h;穴注+贴敷组穴位注射后随即进行中药贴敷6h;对照组取穴同治疗组,以同量的生理盐水及空贴代替。隔天操作一次,3次为一疗程,共进行四个疗程。肺组织HE染色观察气道炎症情况,ELISA法检测血清Ig E、肺组织匀浆IL-10及IL-17的含量;免疫组织化学(SABC)法检测肺组织ICAM-1的表达。结果:1各组大鼠行为学表现:对照组大鼠呼吸平稳,雾化时可见蜷缩抱团休息现象,无喘促等特殊表现,雾化后精神、饮食正常;模型组大鼠雾化激发时不同程度出现呼吸频率快,张口呼吸、点头呼吸,喷嚏,挠鼻,烦躁不安,腹肌抽动,口鼻及爪甲处紫绀,甚至行动缓慢,瘫软,大小便失禁等,随激发次数增加而症状逐步加重,其中由于哮喘发作死亡1只,数次激发后大鼠活动、饮食明显减少,且有毛色无华,竖毛等表现,大鼠模型具备哮喘特征。穴注组、贴敷组、穴注+贴敷组上述症状表现不明显,可见烦躁不安、点头样呼吸、搔鼻,但口唇爪甲紫绀较轻,个别可见伏地不动,大小便失禁,但随激发次数减少及治疗次数增多,激发表现逐渐好转,穴注+贴敷组好转较明显,治疗组雾化后饮食活动未见明显变化。2 HE染色:对照组:细支气管上皮完整,形态规则,支气管管壁未见增生,肺泡形态规则,肺泡壁规整,未见增生及炎性浸润。模型组:气管周围及肺组织大量炎性细胞浸润,支气管狭窄变形,腔内可见脱落上皮细胞,黏膜皱襞增多,黏膜水肿,肺泡壁及肺间隔明显增厚、充血,肺泡腔明显变小甚至消失。穴注组:与模型组相比,炎性细胞浸润减轻,支气管形态稍有狭窄等改变,肺泡壁及肺间隔增厚减轻,肺泡形态欠规则。贴敷组:与模型组相比,细支气管形态较规则,腔内未见明显上皮细胞脱落,管壁有炎性细胞浸润,平滑肌有所增厚,肺泡壁及肺间隔可见增厚减轻,肺泡形态欠规则。穴注+贴敷组:细支气管形态较规则,管周可见炎性细胞,管壁轻度增生,黏膜较正常,肺泡腔形态尚可,个别肺泡壁有所增厚及炎性细胞增多。3 Ig E含量测定结果:模型组血清Ig E明显高于对照组,有显著性差异(P<0.01);穴注组、贴敷组、穴注+贴敷组三组大鼠的Ig E含量均低于模型组,有显著差异(P<0.01);穴注+贴敷组Ig E含量较穴注组、贴敷组低(P<0.05);穴注组与贴敷组Ig E含量无明显差异(P>0.05)。4 IL-10含量测定结果:模型组肺组织IL-10含量明显低于对照组,有显著性差异(P<0.01),穴注组、贴敷组、穴注+贴敷组三组大鼠的IL-10含量均高于模型组,差异显著(P<0.01),穴注+贴敷组IL-10含量较穴注组、贴敷组高,差异有统计学意义(P<0.05),穴注组与贴敷组IL-10含量无明显差异(P>0.05)。5 IL-17含量测定结果:模型组肺组织IL-17含量明显高于对照组,有显著性差异(P<0.01);与模型组相比,穴注组、贴敷组、穴注+贴敷组三组大鼠的IL-17含量减低,有显著差异(P<0.01);穴注+贴敷组IL-17含量较穴注组、贴敷组低,差异有统计学意义(P<0.05),穴注组与贴敷组IL-17含量无明显差异(P>0.05)。6 ICAM-1表达:免疫组化可见,对照组支气管周围可见少量阳性细胞;模型组支气管周围以及支气管分泌物及肺间质、肺泡壁棕黄色颗粒表达较多;穴注组和贴敷组支气管周围、肺间质肺泡壁棕黄色颗粒较模型组少;穴注+贴敷组支气管周围、肺间质、肺泡壁棕黄色阳性细胞表达不明显。各组平均光密度值比较:模型组肺组织ICAM-1表达明显高于对照组,有显著性差异(P<0.01),穴注组、贴敷组、穴注+贴敷组三组大鼠的ICAM-1表达均低于模型组,差异显著(P<0.01),穴注+贴敷组ICAM-1表达较穴注组、贴敷组低,差异有统计学意义(P<0.05),穴注组与贴敷组ICAM-1表达无明显差异(P>0.05)。结论:1根据模型组大鼠症状表现以及各项检测指标,HE染色提示,支气管哮喘大鼠造模成功。2支气管哮喘大鼠血清Ig E的含量增多,肺组织IL-10含量减少、IL-17含量增多,ICAM-1在肺组织的表达增多,并与大鼠激发哮喘症状以及肺脏病理表现变化一致,提示IL-10、IL-17、Ig E、ICAM-1均参与了哮喘的发病。3穴位注射草分枝杆菌、中药贴敷可能是通过降低哮喘大鼠Ig E水平,提高哮喘大鼠肺组织中IL-10表达,降低IL-17表达,降低ICAM-1的表达,来减轻气道炎症的发生,调节免疫平衡,两种方法综合应用较单独应用效果更佳。