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猕猴桃是一种原产于中国、营养价值较高的水果,在我国有着广泛的种植。正是由于猕猴桃较高的营养价值,使得它具有很好的市场前景。但是,目前关于猕猴桃的食源性致病菌方面的安全性评价研究资料还很缺乏。因此,本次实验的目的是对猕猴桃的重要产地之一——陕西的猕猴桃样品的食源性致病菌的污染情况进行安全性评价。本次实验通过对陕西境内周至和眉县两处处猕猴桃果园和周至、宝鸡的两处加工厂等处的猕猴桃样本进行采集后,采用国标和链式聚合酶反应相结合的方式对样本中食源性致病菌进行了鉴定,并对分离菌株的致病性、血清型和耐药性作了进一步的分析。为了更有效的保证猕猴桃产品的安全,对样本中分离得到的菌菌株应用脉冲场凝胶电泳和多位点序列分型进行了溯源分析。同时,针对市场上商业化程度较高的猕猴桃果汁中可能存在的食源性致病菌,采用实时荧光定量链式聚合酶反应的方法,研究出一个能够同时检测猕猴桃果汁中三种可能存在的食源性致病菌的方法。主要研究成果如下:(1)从周至和眉县的果园共采集了348份猕猴桃果园样本,猕猴桃加工厂中共采集了59个样本。果园中鲜果、落果、土壤、空气和灌溉水的大肠杆菌阳性率分别为18.3%、35.0%、69.2%、0.0%和25.0%;周至加工厂和宝鸡东来加工厂的大肠杆菌的阳性率分别为66.7%和34.5%。果园的鲜果、落果中金黄色葡萄球菌的阳性率分别为3.9%、1.0%;周至加工厂和宝鸡加工厂中金黄色葡萄球菌的阳性率分别为23.3%和6.9%。所有采集的样本的沙门氏菌的阳性率为0.0%。(2)通过对所分离得到的160株大肠杆菌和14株金黄色葡萄球菌相关毒力基因进行检测发现:三株来自果园的菌株含有产志贺毒素2型基因,两株金黄色葡萄球菌中含有肠毒素b和肠毒素h。分离出的三株产志贺毒素大肠杆菌的血清型分别为:O86a:MH,O158:H21,O158:H2。(3)160株大肠杆菌和14株金黄色葡萄球菌表现出不同的耐药性。在160株大肠杆菌中,对几种抗生素的耐药率分别为链霉素65.6%、甲氧苄啶-复方新诺明25.6%、头孢西丁20.6%、头孢曲松19.4%、萘啶酸16.9%、四环素15.0%,对其他的抗生素耐药率均低于10.0%。在14株金黄色葡萄球菌中,对几种抗生素的耐药率分别为红霉素21.4%、苯唑西林7.1%、头孢西丁7.1%、阿莫西林7.1%、氨苄西林7.1%。其中15.6%的大肠杆菌和78.6%的金黄色葡萄球菌不耐药。(4)脉冲场凝胶电泳结果显示在加工厂中,加工用水和刀片之间存在着交叉污染。在果园中,灌溉用水可能导致猕猴桃的污染。(5)利用实时荧光链式聚合酶反应,通过设计引物扩增产物溶解曲线的差异来建立了一个能够有效检测猕猴桃果汁中大于101 CFU/mL的产志贺毒素大肠杆菌、沙门氏菌和单核细胞增生李斯特菌。