CD3单抗加白消安联合氟达拉宾预处理方案在小鼠半相合造血干细胞移植中预防GVHD的作用研究

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目的:明确在建立的白消安联合氟达拉宾化疗预处理小鼠半相合造血干细胞移植(Haploidentical hematopoietic stem cell transplantation, Haplo-HSCT)移植物抗宿主病(Graft versus host disease, GVHD)模型上,加用CD3单抗能够预防GVHD,并初步探讨其机制。方法:应用白消安联合氟达拉滨预处理方案化疗、以C57BL/6小鼠和BALB/C小鼠杂交的子一代小鼠(CB6F1)为受者,以C57BL/6为供者建立半相合造血干细胞移植GVHD模型。将CB6F1小鼠分为3组,Anti-CD3联合化疗预处理组(Anti-CD3组)以CD3单抗联合白消安和氟达拉滨预处理;化疗预处理组(SPL组)和对照组(BM组)以白消安联合氟达拉滨预处理。Anti-CD3组和SPL组移植C57BL/6的骨髓细胞和脾细胞,BM组只移植供者骨髓细胞。应用流式细胞术验证供者细胞的植入、在受者淋巴组织的比例以及整合素的表达情况,并通过观察受者小鼠移植后小鼠体重变化和生存率、aGVHD的临床评分和靶器官的组织病理及评分等方法,对比anti-CD3组和SPL组GVHD模型小鼠的aGVHD的严重程度,受者各器官中供者T淋巴细胞的浸润情况以初步探测CD3单抗作用机制。结果:①预处理方案的确定:确定白消安15ug/g和氟达拉滨10ug/g,每天两次,共4天的预处理化疗为理想的预处理化疗方案。确定CD3单抗用量为5ug/g,于移植前13天和8天各给药一次。②成功建立半相合造血干细胞移植aGVHD模型:观察到典型的体重减轻、腹泻、弓背、脱毛等aGVHD临床症状;流式验证供者CD4+T细胞、CD8+T细胞、B细胞成功植入;病理切片见受者GVHD靶器官组织有明显的淋巴细胞浸润。③CD3单抗预处理预防GVHD的疗效:Anti-CD3组生存率明显高于SPL组(P<0.01);体重下降较SPL组缓慢;GVHD症状没有或较SPL组减轻;靶器官病理组织GVHD评分较SPL组明显减轻(P<0.01)。④CD3单抗预处理预防GVHD的机制: Anti-CD3组供者T淋巴细胞比例在外周淋巴组织中较SPL组明显减少;在受者肠系膜淋巴结(MLN)中,供者T细胞的整合素表达较SPL组明显减低。结论:1.联合CD3单抗的化疗预处理方案在半相合造血干细胞移植中可以有效预防GVHD。2. CD3单抗是通过影响供者T细胞减少侵入受者靶器官而起预防GVHD作用的。
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