巢式PCR技术对HIV-1阳性孕产妇的新生婴儿早期诊断的研究

• 作 者: 吴少卿
• 机 构: 广州医科大学
• 出 处: 广州医学院 广州医科大学
• 发表日期: 2008年期
• 关键词: 巢式PCR技术 艾滋病 新生婴儿 核酸检测 母婴传播

目的：建立HIV-1阳性孕产妇的新生婴儿核酸检测的早期辅助性诊断方法,为协助临床制定合理的治疗方案,指导新生儿计划免疫和了解艾滋病病毒的分子流行情况提供依据,帮助有效的阻断艾滋病母婴传播,降低儿童感染艾滋病的概率。
方法：
(1)收集深圳市宝安区2002-2007年经HIV-1初筛实验阳性的孕产妇样本19例,婴儿样本6例(月龄小于18个月)。对所有标本进行HIV-1抗体确认实验(Western blot实验,简称WB)。
(2)所有标本均采用QIAamp Viral RNA extraction Mini kit试剂盒提取病毒RNA,经逆转录酶用随机引物合成cDNA,以供PCR检测用。根据HIV-1序列设计多条PCR引物,以合成后的cDNA为模板,用巢式聚合酶链反应方法对40例HIV-1抗体确认实验阳性的样本进行扩增,对PCR产物进行回收纯化及核苷酸序列测定分析,扩增的结果与HIV-1抗体确认实验(WB法)进行对照研究,选出最佳PCR引物并优化PCR反应条件。
(3)应用优化后的巢式PCR技术对HIV-1阳性的19例孕产妇和6例婴儿样本进行检测。
结果：
(1)19例经HIV-1初筛实验阳性的孕产妇样本和6例18个月内的婴儿样本,HIV-1抗体确认实验全部阳性,婴儿WB法膜上的谱带和母亲一样。
(2)成功设计出PCR引物,优化后的巢式PCR技术对40例HIV-1抗体确认实验阳性的样本扩增出38例,其敏感性达(95％),阴性标本无扩增片段,其特异性为100％。
(3)HIV-1抗体确认实验阳性的19例孕产妇和6例婴儿样本,经巢式PCR扩增得到19例阳性孕产妇的片段,1例阳性婴儿片段。婴儿样本的基因型为CRF01-AE重组亚型。
结论：
(1)用WB法对新生婴儿标本进行HIV-1抗体确认实验阳性者并不能说明是HIV感染,因为母体HIV抗体可存在婴儿体内大约15个月之久。
(2)已建立的巢式PCR技术可应用于对HIV-1阳性孕产妇的新生婴儿进行早期辅助性核酸诊断。
(3)PCR产物的序列测定可用于分子流行病学的研究。