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本文克隆了鳜补体经典途径的各基因,并研究了它们的组织表达和ISKNV感染后表达水平的变化。
鳜补体经典途径各基因的获得:根据已经在GenBank上登录的补体经典途径基因的序列设计合成简并引物,利用RT-PCR和RACE技术由鳜肝脏RNA扩增获得了鳜补体经典途径的基因共14个。鳜C1q含有三个亚基,mClqL1全长990bp,开放阅读框(ORF)为723bp,编码240个氨基酸;mClqL2全长1193bp,ORF为756bp,编码251个氨基酸;mClqL3全长1260bp,ORF为726bp,编码241个氨基酸。鳜Clr/s(mClr/s)全长为2548bp,ORF长2118bp,编码705个氨基酸。鳜Bf/C2(mBf/C2)全长2653bp,ORF为2313bp,编码770个氨基酸。鳜C3(mC3)全长5170bp,ORF为4977bp,编码1658个氨基酸。鳜C4(mC4)全长5807bp,ORF长5130bp,编码1709个氨基酸。鳜C5(mC5)全长5392bp,ORF为5061bp,编码1686个氨基酸。鳜C6(mC6)全长3119bp,ORF为2823bp,编码939个氨基酸。鳜C7(mC7)全长2813bp,ORF为2490bp,编码829个氨基酸。鳜C8也是由三个亚基组成,鳜C8-alpha(mC8A)全长2107bp,ORF为1797bp,编码598个氨基酸;鳜C8-beta(mC8B)全长1868bp,ORF为1764bp,编码587个氨基酸;鳜C8-gamma(mC8G)全长bp,ORF为660bp,编码219个氨基酸。鳜C9(mC9)全长2412bp,ORF为1761bp,编码586个氨基酸。利用软件对克隆的基因进行了生物信息学分析,发现在结构域方面与已经报道的基因相似,聚类分析的结果则显示鳜补体经典途径的各基因与鱼类的相关基因聚在一起,与它们实际的分类地位是一致的。鳜补体经典途径各基因的组织表达:为了研究鳜补体经典途径在ISKNV感染中所起的作用,利用RT-PCR技术对鳜补体经典途径各基因的组织表达作了初步研究。mClr/s、mBf/C2、mC3、mC5、mC7、mC8B和C9仅在肝中有表达,而mClqL1、mClqL2、mC4和C6在肝、脾、头肾、后肾和性腺5种组织中均有表达。还利用Northern杂交技术对mClqL1和mClq2进行了研究,发现两者在肝中的表达均最低;mClqL1在头肾中表达最高,而mClq2在脾中的表达量最高。在攻毒后,鳜补体经典途径的各基因的表达都有变化,说明鳜补体途径的各基因与ISKNV的感染有一定的关系,但具体的机制还有待于进一步研究。