论文部分内容阅读
内分泌干扰物（EDCs）广泛存在于我国各大水体中，对终身生活在水中的鱼类影响巨大。其中，己烯雌酚（DES）和乙炔基雌二醇（EE2）是长江流域的典型EDCs。前期研究显示，DES和EE2能诱导全雄黄颡鱼幼鱼精巢发育障碍、减数分裂阻滞，甚至导致大规模生殖细胞凋亡。然而在这一过程中，生殖细胞何时发生凋亡，发育不同时期的生殖细胞凋亡的时序性是否有差别，尚不得而知。为深入研究EDC诱导黄颡鱼雄性生殖细胞凋亡的分子机制，本实验在黄颡鱼克隆了数个生殖细胞和减数分裂特异的标记基因（Oct4、Dazl、Vasa、Scp3和Dmc1）的部分cDNA，并通过RT-PCR和原位杂交研究了上述基因的组织和细胞表达模式。对本研究克隆的标记基因的cDNA序列分析结果显示，其序列均在进化上高度保守。进一步分析表明，黄颡鱼Oct4、Dazl、Dmc1和Scp3分别与大马哈鱼、斑点叉尾鮰、虹鳟等鱼类的相应基因编码的蛋白具有较高的相似性。多重序列对比结果显示，黄颡鱼Vasa具有脊椎动物保守的8个保守区域，暗示其功能在进化上的保守性。组织表达研究结果显示，上述基因均仅表达于黄颡鱼成鱼性腺（精巢和卵巢）中，其中Oct4在卵巢中的表达略高于精巢，而Dmc1和Dazl在精巢中的表达略高于卵巢；其余基因的表达没有性差。原位杂交结果显示，上述标记基因均仅表达于黄颡鱼成鱼雌雄性腺生殖细胞。其中，Oct4和Dazl在卵巢中仅表达于卵原细胞及发育早期的卵母细胞（PG和PV期），在精巢则主要表达于精原细胞和精母细胞；Dmc1和Scp3表达的细胞类型与Oct4和Dazl相似，但在减数分裂过程中的生殖细胞中的信号最强；而Vasa在黄颡鱼卵巢各个发育时期的卵母细胞中均有表达，在雄性则仅表达于精原细胞和初级精母细胞。本实验通过RT-PCR和原位杂交初步探明上述基因在黄颡鱼成鱼中的组织表达模式和在性腺中的细胞表达模式，确定其在黄颡鱼生殖细胞发育过程中的时序性，为深入研究EDC诱导黄颡鱼生殖细胞凋亡的分子机制及其可能的调控模式奠定了坚实的基础。