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目的：在大鼠身上建立非机械压迫性坐骨神经痛模型,以医用纯氧为阴性对照,运用行为学、组织病理学评价医用臭氧对该模型的影响,并运用透射比浊法、间接ELISA法和免疫组织化学染色法观察医用臭氧对该模型中外周血免疫球蛋白IgG和IgM、细胞因子、局部抗原抗体复合物的影响作用,从而探讨医用臭氧对坐骨神经痛中自身免疫应答的影响。
方法：
1 分组和模型建立：将40只SD大鼠随机分为四组,每组10只。A组(正常对照组),B组(模型对照组),C组(医用臭氧组),D组(医用纯氧组)：切下鼠尾并于其中取出尾椎髓核,置于坐骨神经旁,使其接触但并不压迫,用弹性硅胶袖套环绕该段坐骨神经予以保护并缝线固定于周围肌肉,硅胶导管近端经皮下隧道在颈后另取切口引出,正常组不放置自体髓核,其余手术步骤一致。
2 注射干预：模型建立后第14天,将臭氧发生器与医用纯氧氧气瓶连接,设定输出氧浓度为30ug/ml混合气体臭,向坐骨神经区注射臭氧气体约5ml；医用纯氧组同法注射纯氧气体约5ml,注射完毕后将导管近端开口封闭以防止气体溢出；模型对照组不做任何操作。
3 对四组进行行为学、爬坡实验及后肢机械缩爪阈值的对比。
4 检测血清免疫球蛋白、IL-6、IL-12、TNF-α含量检测,坐骨神经HE染色、移植髓核中抗原抗体复合物沉积以及坐骨神经PLA2活性测定结果进行统计学分析。
结果：
1 模型建立后第14天模型对照组,医用臭氧组及医用纯氧组大鼠表现出活动频繁、易激惹的现象,爬坡试验为Ⅲ级,后肢出现较明显的痛觉过敏(P<0.01),模型建立成功。
2 注射干预后,模型对照组及医用纯氧组仍然表现出活动频繁、易激惹的现象,爬坡试验为Ⅲ级,后肢机械缩爪阈值较正常组及注射干预前明显降低(P<0.05)；医用臭氧组有一只大鼠仍然表现出活动频繁、易激惹的现象,其余大鼠活动情况较注射干预前明显好转,爬坡试验有两只为Ⅲ级,其余为Ⅳ级,后肢机械缩爪阈值较模型组及注射干预前有显著增高(P<0.05)。
3 造模后,模型对照组和医用纯氧组大鼠坐骨神经根出现炎性反应,有不同程度的神经损害；医用臭氧组神经根炎性反应较模型对照组明显减轻,正常细胞较模型对照组多。
4 模型对照组与正常组相比,总IgG, IgM含量升高(P<0.05)；医用臭氧组与模型对照组相比,其外周血总IgG, IgM含量有统计学意义的降低(P<0.05),与医用纯氧组相比有统计学差异(P<0.05)。
5 模型组大鼠血清细胞因子(IL-6、IL-12、TNF-α)与正常组相比含量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；臭氧组大鼠血清细胞因子(IL-6、IL-12、TNF-α)含量较模型组及纯氧组明显降低(P<0.05),差异有统计学意义。
6 模型组大鼠移植髓核段坐骨神经中PLA2与正常组相比含量较对照组明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)；医用臭氧组与模型组及纯氧组相比,大鼠坐骨神经中PLA2活性较模型组有明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。
7 正常对照组大鼠髓核中无抗原抗体复合物阳性沉积,模型对照组9只大鼠有抗原抗体复合物存在,阳性率为 90%,与正常对照组相比有统计学意义(P<0.01)；医用臭氧组一只大鼠有抗原抗体复合物存在,阳性率为 10%,阳性率小于模型对照组(P<0.05)；医用纯氧组8只大鼠有抗原抗体复合物存在,阳性率为80%,阳性率与模型对照组相比无统计学意义(P>0.05)。
结论：
1 医用臭氧干预大鼠非压迫性坐骨神经痛模型能够较为精确地模拟临床上其微创注射治疗腰椎间盘突出症的手术过程,达到类似的治疗效果。
2 自体髓核可以诱导坐骨神经痛动物模型的异常自身免疫反应,体现在细胞免疫及体液免疫两方面。
3 医用臭氧能够在一定程度上缓解自体髓核引起的异常自身免疫应答,这可能是临床上其治疗腰椎间盘突出症的主要作用机理。