【摘 要】
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前期实验工作通过基因芯片技术初步检测野生型正常小鼠、AQP4敲除正常小鼠和AQP4敲除自发脑积水小鼠的大脑组织中基因群的表达差异,筛选出可能相关基因,为进一步深入研究脑积
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前期实验工作通过基因芯片技术初步检测野生型正常小鼠、AQP4敲除正常小鼠和AQP4敲除自发脑积水小鼠的大脑组织中基因群的表达差异,筛选出可能相关基因,为进一步深入研究脑积水病理过程提供新线索。其中神经胶质成熟因子beta(GMFβ)的mRNA水平在脑积水病理条件下比正常情况下调最为明显,预示其可能是一种参与脑积水病理过程相关的蛋白因子,需要进一步深入研究。应用RT-PCR技术,从成年CD1小鼠大脑总RNA中获得GMFβ基因编码区全长DNA序列,将此序列克隆入GST融合蛋白原核表达载体pGEX-2T,成功构建重组表达质粒pGEX-2T-GMFβ;转化大肠杆菌E.coli.BL21/DE3,用IPTG大量诱导GST融合蛋白表达,优化表达和提取条件以提高上清可溶性蛋白含量,使用谷胱甘肽-琼脂糖凝胶4B进行亲和纯化,免疫兔子得到多克隆抗血清,经ELISA和免疫组化鉴定抗体的效价和特异性较好;进行RT-PCR和免疫印迹检测,半定量分析脑积水小鼠(AQP4-/-,spontaneous hydrocephalus)大脑组织的GMFβ表达比正常小鼠(wt.nor.和AQP4-/- nor.)减少,与基因芯片检测结果基本一致。
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