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视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞的凋亡在多种视网膜变性类疾病的发病过程中起了重要作用，但由于细胞凋亡机制复杂，阻碍了临床对该类疾病的有效治疗，因此有必要进一步完善RPE细胞的凋亡机制。线粒体途径在RPE细胞凋亡中的重要作用已经得到了证实，本课题针对线粒体途径中由凋亡诱导因子（apoptosis inducing factor，AIF）介导的非依赖Caspase途径进行研究，完善RPE细胞的凋亡机制，并通过褪黑激素（Melatonin，MLT）的干预了解该途径在氧化应激诱导RPE细胞凋亡中的地位。
目的:
研究体外氧化应激诱导RPE细胞凋亡模型中，AIF的表达变化，尤其是AIF从线粒体释放进入细胞质的转位变化，并通过MLT的干预，探讨AIF在RPE细胞凋亡中所占的地位，对线粒体途径在氧化应激诱导RPE细胞凋亡的机制进一步完善。
方法:
使用过氧化氢(H2O2)建立体外氧化应激诱导RPE细胞凋亡模型，并进行Annexin V/PI流式细胞和甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyl tetrazolium，MTT)检测RPE细胞凋亡和增殖的变化，检测细胞内活性氧（reactive oxygen，ROS）的产生和线粒体膜电位的变化。通过免疫印迹（Western blot）、荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain raction)和免疫荧光法检测AIF在RPE细胞表达的变化，了解AIF介导的非Caspase途径是否参与了H2O2诱导的RPE细胞凋亡；通过观察加入MLT后RPE细胞ROS的产生、细胞凋亡率和AIF的表达变化，探讨AIF的地位。应用SPSS 10.0分析软件对定量结果进行数据分析。
结果:
实验发现RPE细胞随着H2O2剂量增加和作用时间延长增殖受到显著抑制（GLM检验：F=14.06，P=0.0011），各实验组与空白对照组相比有显著差异（ANOVA检验：α=0.05水平），ROS产生增加，并以线粒体的产生为主，Rh123荧光强度随作用时间增加而增强（GLM:F=17.67、P=0.0031），细胞的凋亡率增加；AIF的表达明显增加，以细胞质内的增加为主，线粒体的表达增加不明显；进行MLT干预后发现ROS的产生受到了明显的抑制；RPE细胞的凋亡率MLT干预组与对照组相比明显下降（t检验：24h组T=8.9622,P=0.0009,48h组T=6.8792，P=0.0023）；MLT干预后AIF的表达没有受到抑制，荧光定量PCR显示AIFmRNA的表达明显增加，线粒体和细胞质的蛋白表达量都明显增加。
结论:
AIF介导的非Caspase依赖途径参与了氧化应激诱导的RPE细胞凋亡。通过MLT的干预发现MLT对AIF的产生和释放没有明显的抑制作用，MLT能够有效抑制氧化应激诱导的RPE细胞凋亡，因此推断AIF可能在氧化应激诱导RPE细胞凋亡过程中不占主要地位。