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乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)慢性感染是威胁公众健康的严重问题。目前对慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B，CHB)尚缺乏有效的根治手段，发展新的治疗策略非常必要。树突状细胞疫苗(dendritic cell vaccine，DC疫苗)是指负载了相关抗原的成熟DC，是近年发展起来的最有潜力的新型免疫治疗方法之一。DC疫苗对某些肿瘤的临床治疗已取得显著疗效，而由HBV表面抗原(HBsAg)负载的DC疫苗能在健康志愿者和CHB病人体内诱导出抗HBV特异性免疫反应。因此，发展HBV特异性DC疫苗在治疗CHB的临床应用中具有重要意义，建立DC疫苗制备的质量控制与评价体系，是HBV特异性DC疫苗临床试验的前提。HBV核心抗原(HBcAg)的抗原性强于HBsAg，而针对HBcAg的细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic lymphocyte，CTL)反应是决定病毒是否被清除的关键。因此，我们采用基因重组HBcAg负载CHB病人或HBV感染相关性肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)病人的单核细胞来源的DC(monocyte-derived DC，MoDC)，制备HBV特异性DC疫苗(cDC)。在本研究中，我们首先对HBV感染相关性HCC病人的DC疫苗制备过程进行了全程质量控制，主要描述了外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)采集、单核细胞分化为MoDC、HBcAg负载、促成熟、收获、表型和功能评价的过程。结果显示：(1)制备的HBV特异性DC疫苗(cDC)，表面主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)分子和共刺激分子表达明显提高，其功能也明显增强；(2)cDC纯度可达70％，存活率可达95％，均符合临床试验要求；(3)冻存和复苏过程对DC疫苗的表型和功能无明显影响。该部分研究对于进一步制备临床应用级DC疫苗打下了坚实的基础。其次，我们在体外检测了CHB病人的HBV特异性DC疫苗的免疫功能。发现CHB病人的cDC能有效刺激自体CD4和CD8 T细胞分泌IFN-γ，而刺激CD4和CD8 T细胞分泌IL-4的能力有限。这些结果表明，HBcAg负载的DC疫苗可以诱导自体T细胞向Th1极化。我们又进一步检测了CHB病人的HBV特异性DC疫苗诱导HBV特异性CTL的能力。结果发现，cDC可以在体外大量扩增CHB病人的HBVcore18-27特异性CTL，并对靶细胞具有特异性杀伤功能。最后，我们观察了CpG-ODN2216(CpG-2216)激活的浆细胞样DC(plasmacytoid DC，pDC)能否进一步促进HBcAg负载的DC疫苗的功能。结果显示：(1)CpG-2216活化的pDC可明显促进cDC表面共刺激分子表达和细胞因子分泌的能力；(2)CpG-2216活化的PBMC培养上清也可明显促进CHB病人的cDC表面的共刺激分子表达和细胞因子分泌，增强cDC诱导扩增CTL的能力；(3)体外阻断IFN-α可明显降低CpG-2216活化的pDC对CHB病人的cDC的促进作用。结果表明，CPG-2216可通过激活pDC释放大量IFN-α协同促进CHB病人的cDC成熟和功能。通过以上研究，我们建立了HBV特异性DC疫苗体外制备的质量控制程序；我们制备的HBcAg负载的DC疫苗在体外可诱导CHB病人的自体T细胞向Th1极化，同时可大量扩增HBVcore18-27特异性CTL；并且通过CpG-ODN2216刺激pDC可进一步提高DC疫苗的免疫功能。本研究为进一步制备临床应用级DC疫苗打下了坚实的基础。