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噬菌体抗体是指将抗体分子（或片段）与噬菌体外壳蛋白融合，展示于噬菌体颗粒表面的一种新型基因工程重组抗体。其特点是既可以识别和结合抗原，又能够感染宿主菌进行扩增。将动物体内全套抗体可变区基因克隆出来，组装到合适的载体内，表达在噬菌体表面，即构成噬菌体抗体库。噬菌体抗体库技术在体外摸拟体内抗体克隆的筛选和成熟过程，从而实现绕过动物免疫制备单克隆抗体。目前，噬菌体抗体库技术广泛地应用于生命科学研究的各个领域。
本论文以reteplase（瑞替普酶）为模式蛋白，探讨噬菌体抗体库技术在亲和纯化领域中的应用。
一、对从噬菌体抗体库筛选人源性单链抗体（scFv），用于药物蛋白纯化的可行性进行了研究。具体内容为：
1．噬菌体抗体库的筛选
将reteplase固定在免疫管上，对人源性单链噬菌体抗体库进行淘筛。经过四轮筛选，噬菌体抗体库得到了选择性富集，投入产出比提高了近1万倍，阳性克隆率高达93％。整个筛选过程方便、快捷，显示了噬菌体抗体库技术筛选抗体的高效性。
2．单克隆噬菌体抗体的制备
从平板上挑取单个菌落，单独培养。经辅助噬菌体感染后，噬菌体抗体分泌到培养上清中。ELISA检测得到多个与reteplase结合的特异性噬菌体抗体克隆。
对ELISA阳性最强的克隆进行测序，证实筛选到的克隆含有scFv基因，具有人源性序列。它含有120个氨基酸的重链可变区片段（VH）和118个氨基酸的轻链可变区片段（VL），由一个15肽连接。Gene Bank搜索表明这两个片段分别属于人抗体基因家族的A7基因家族和Kappa基因家族。
3．scFv的可溶性制备
将scFv基因克隆到大肠杆菌表达载体pET29a中，与His-tag融合。转化
b．交联噬菌体具有良好的溶液稳定性，可以耐受酸、碱等亲和层析过程中常用的操作条件；
c．交联度影响交联噬菌体的吸附容量：交联度高则吸附量低；
d．交联噬菌体与reteplase的结合对溶液pH敏感，可用酸或碱作为洗脱剂；
e．交联噬菌体与reteplase的结合常数（K<,A>）为20.4×10<6>mol/L<-1>，结合容量为580ng/10<13>。噬菌体颗粒；
f．交联噬菌体能与reteplase特异性结合。
3）交联噬菌体的应用
最后，对交联噬菌体的应用作了初步研究，从混合物中纯化得到reteplase，证实了交联噬菌体在亲和纯化中的可用性。
本实验表明了交联噬菌体用于亲和纯化的可行性，这种方法结合了抗体库筛选效率高、噬菌体生产成本低、交联噬菌体制备简单方便、以及亲和纯化选择性强等诸多优点，可以作为一种小规模、简单快速、高通量的蛋白质纯化平台。
本论文利用噬菌体抗体库技术，描述了从小规模蛋白纯化到大规模工业生产的亲和配体/载体的筛选和制备方法，这一策略有望为生物制药产业提供新的蛋白纯化平台。