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精子载体法是生产转基因动物的一种简单有效的方法,近年来研究报道越来越多,越来越具有吸引力。精子与DNA混合培养能否捕获外源DNA是精子载体法是否可行的关键。精子与外源DNA的结合受多方面因素影响,本试验设立不同DNA形态(环状和线性化)、不同转染剂(PEI、Transfast、Nanofect)、不同转染时间(30min、60min、90min)以及不同转染温度(17℃、22℃、27℃、32℃、37℃)四种转染方案,通过比较精子活力、活率、转染率、DNA吸附内化率等参数,从而优化猪精子转染体系和条件来探索最佳转染方案,进行猪精子介导基因转移技术优化研究,为用精子介导法制备转基因猪提供实验依据。试验结果显示：线性化DNA转染组与环状DNA转染组无论是在精子活力、活率还是转染率上差异均不显著,线性化DNA转染组活率83.53±1.34、活力52.73±0.92、转染率43.22±1.93,环状DNA转染组活率83.53±0.99、活力52.62±1.77、转染率43.07±1.26,证明外源DNA的不同形态对猪精子共孵育转染效果没有影响。该结果为转座子系统在精子介导基因转移技术中的应用提供了便利,转座质粒在应用中可以不用线性化直接应用,从而节省时间和费用。转染剂PEI和Transfast确实具有促进精子吸附外源DNA的作用,同时在相同条件下PEI的转染效果(46.99±1.99)显著高于Transfast组(33.12±2.02),但是在活力上PEI组(56.03±1.31明显低于Transfast组(66.02±1.31),而转染剂Nanofect对转染完全没有促进作用,相反还阻止了精子对外源DNA的吸附(转染率为0)。转染共孵育的时间并非越长越好,以30min为佳(转染率为43.07±1.26),此时精子吸附外源DNA的能力基本饱和,达到稳定状态,随着时间的延长,转染率不见明显增加,但精子活力、活率均明显下降,综合受精成功率考虑,转染孵育时间以30min为最佳。猪精子与外源DNA的最佳孵育温度为17℃,随着转染温度的升高,精子活力、活率明显降低,同时其转染率基本稳定,不随温度变化而变化,综合受精成功率考虑,转染孵育温度以17℃为最佳。综合结果看来,猪精子共孵育中外源DNA形态对转染效果无影响；转染剂以PEI最优,Transfast次之；共孵育时间以30min为最佳；共孵育温度以178为最佳。