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目的C型凝集素结构域家族4成员D(C-type lectin domain family 4 member D,CLEC4D)基因,其表达的蛋白属于C型凝集素受体,可作为固有免疫细胞上的模式识别受体,识别核苷酸、糖类、脂多糖、以及其他病原体成分和自身配体,通过细胞粘附,细胞-细胞信号传导,内吞抗原、糖蛋白转换等方式,诱发原始宿主防御的复杂信号级联反应,释放炎症细胞因子,炎症趋化因子、诱导免疫应答,对体内平衡和宿主抗病原菌中起重要作用。在1998年首次被描述为受限于小鼠巨噬细胞系。近年来对于它的研究进展逐渐增多,并发现其与结直肠癌以及胰腺导管癌有密切的关系,可以作为二者的外周血肿瘤标志物。本研究主要是探讨CLEC4D在胃癌中的异常表达水平及对胃癌细胞的生物学特征的影响。方法收集2012年1月至2017年12月就诊于天津医科大学肿瘤医院胃部肿瘤科并接受胃癌根治性手术的共114例患者的肿瘤组织及癌旁正常组织。获取患者组织蜡块进行组织芯片实验,检测CLEC4D在114对人胃癌肿瘤组织及癌旁非肿瘤组织中的表达水平,分析其表达水平差异;评估CLEC4D的不同表达水平与患者临床病理资料和生存的联系。用蛋白印迹法(Western Blot,WB)实验及定量逆转录聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain react,q PCR)技术实验分别检测在正常胃粘膜细胞及各胃癌细胞系中CLEC4D的m RNA及蛋白水平的表达差异。构建感染CLEC4D敲降慢病毒及空载慢病毒构建感染病毒后的稳系胃癌细胞株后,分别使用细胞增殖实验、平板克隆实验、细胞迁移及细胞侵袭实验探索胃癌细胞生物学相关特性的变化,判定CLEC4D对其的影响。建立皮下注射移植瘤动物模型后,探索CLEC4D对胃癌细胞在裸鼠体内成瘤能力的影响。通过转录组测序(RNA Sequencing,RNA-seq)技术,检测CLEC4D敲降组胃癌细胞及对照组中差异表达的m RNA,寻找CLEC4D的潜在参与的信号通路及相关调控分子。最后通过WB及q PCR实验探究过表达RNF180对CLEC4D的直接或间接影响。结果1.在胃癌组织中CLEC4D的阳性率是84.2%(96/114),在癌旁正常组织中其阳性率是29.8%(34/114),故CLEC4D在在胃癌组织中的阳性率明显高于癌旁正常组织中,且差异具有统计学意义(P<0.001,?2=68.794)。2.增殖实验发现CLEC4D敲降组细胞的细胞增殖数目相较于对照组明显较少,平板克隆实验发现细胞克隆团数相较于对照组明显较少,迁移实验以及侵袭实验发现细胞迁移数目、侵袭细胞数目相较于对照组显均明显较少。3.动物实验表明CLEC4D敲降组裸鼠的成瘤体积相较于对照组明显较小。4.WB及q PCR实验发现上调RNF180后CLEC4D蛋白表达水平及Mrna表达水平明显下降,证明RNF180对CLEC4D有直接或间接的抑制作用。5.RNA-seq结果表明与对照组相比,CLEC4D的m RNA表达水平在多种通路中有明显差异,其中包含TP53、STAT3及TGFB2分子。结合本实验CLEC4D明显影响胃癌细胞的增殖及迁移等特性,认为CLEC4D可能参与TP53、STAT3及TGFB2分子的调控。结论1.在人胃癌组织中CLEC4D的蛋白表达水平相较于癌旁正常组织明显较高,CLEC4D蛋白的表达与患者的生存密切负相关。2.CLEC4D能够促进人胃癌细胞的增殖、侵袭及迁移等相关生物学特性。3.CLEC4D能够促进小鼠体内肿瘤的生长。4.CLEC4D受到RNF180直接或间接调控,进而参与到在胃癌发展及预后中起重要作用的且与RNF180相关的淋巴结转移的调控通路。5.CLEC4D可能参与TP53、STAT3及TGFB2分子的调控,进而调控胃癌细胞增殖、迁移等生物学特性,具体机制有待后续实验进一步探索证明。