不结球白菜‘矮脚黄’自交不亲和性的SSR分子标记

• 作 者: 葛婷婷
• 机 构: 南京农业大学
• 出 处: 南京农业大学
• 发表日期: 2013年期
• 关键词: 不结球白菜 自交不亲和基因 遗传分析 SSR分子标记 遗传距离

不结球白菜(Brassica campestris ssp. chinensis Makino)是十字花科(Cruciferae)芸薹属(Brassica)作物二倍体基本种之一,是我国南方重要的叶菜类蔬菜,在日常生活中占有重要的地位。不结球白菜属于异花授粉作物,具有自交不亲和特性。本研究利用不结球白菜自交不亲和材料与自交亲和材料配置杂交组合,获得F2分离群体,并在此基础上进行自交不亲和性状的遗传分析以及SSR分子标记的筛选。研究结果如下：1.以不结球白菜‘002’和‘210’为亲本,配制2个杂交组合F2(‘002’ב210’)和F2(‘210’ב002’),研究了不结球白菜F2群体自交不亲和性状的遗传特性。通过亲和指数的测定,对其亲和性进行统计和X2测验,结果表明两个杂交组合在F2群体中自交不亲和性状发生分离,出现了自交不亲和与自交亲和两种类型的植株。F2(‘002’ב210’)分离群体调查了78株,其中自交亲和植株有57株,自交不亲和植株有21株。F2(‘210’ב002’)分离群体有158株,其中自交亲和植株有113株,自交不亲和植株有45株。自交亲和植株与自交不亲和植株分离比符合3：1。自交亲和性对自交不亲和性是由一对等位基因控制的显性遗传性状。2.为了找到与不结球白菜自交不亲和基因连锁的分子标记,选用352对SSR引物对不结球白菜自交不亲和和自交亲和的亲本进行PCR扩增和电泳检测,结果表明：亲本中有21对SSR引物可稳定表现出多态性,多态性比例为6%。利用筛选出的21对SSR引物在F2(‘210’ב002’)的158个单株中进行SSR扩增,获得3个与不结球白菜自交不亲和基因连锁的分子标记,分别为Nal2E02, KBRH138G23以及sR6688.通过Mapmaker3.0软件计算连锁距离,3个标记与自交不亲和基因的遗传距离分别为3.08cM,5.35cM和12.91cM.3.在获得与自交不亲和基因连锁的分子标记Na12E02的基础上,采用MISA和Primer3.0软件在Na12E02附近3cM范围开发设计SSR引物,最终得到22对SSR分子标记。研究发现,开发设计的22对SSR引物均能在亲本中扩增出较为清晰的条带,有效引物比例为100%,其中5对引物在亲本中具有多态性,多态性引物比例为22.7%。将筛选得到的5对SSR引物在F2(‘210’ב002’)分离群体的158个单株中进行进一步验证,得到一个与自交不亲和基因紧密连锁的分子标记BrSS15.通过Mapmaker3.0软件计算遗传距离为0.49cM。这为自交不亲和基因连锁的分子标记辅助选择,以及该基因的进一步定位和克隆分析奠定了良好的基础。