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本研究以蔗糖密度梯度离心方法纯化H5、H7和H9亚型禽流感病毒,分别免疫Balb/c小鼠后取脾细胞与SP2/0融合,制备了两株禽流感病毒H9亚型血凝素特异性单克隆抗体11A5和11B2;两株禽流感病毒H5亚型血凝素特异性单克隆抗体22C3和27C5;两株禽流感病毒H7亚型血凝素特异性单克隆抗体10B5和10C5;两株针对H5和H7亚型禽流感病毒共同位点的单克隆抗体20B6和16A1。 通过ELISA、HI和Western-blot方法鉴定证明11A5和11B2两株单抗与H5N1、H7亚型禽流感病毒、新城疫病毒LaSota株、减蛋综合症病毒、禽副粘2型病毒Yucaipa株HI均无交叉,与H5N1、H7亚型禽流感病毒和正常尿囊液ELISA反应均为阴性,都是针对H9亚型禽流感病毒HA1蛋白的。22C3和27C5两株单抗与H9N2、H7亚型禽流感病毒、新城疫病毒LaSota株、减蛋综合症病毒、禽副粘2型病毒Yucaipa株HI均无交叉,与H9N2、H7亚型禽流感病毒和正常尿囊液ELISA反应均为阴性,都是针对H5亚型禽流感病毒HA1蛋白的。10B5和10C5两株单抗与H5N1和H9N2亚型禽流感病毒、新城疫病毒LaSota株、减蛋综合症病毒、禽副粘2型病毒Yucaipa株HI均无交叉,与H5N1、H9N2禽流感病毒和正常尿囊液ELISA反应均为阴性,都是针对H7亚型禽流感病毒HA1蛋白的。通过Western-blot证明20B6和16A1两株单抗都可与H5和H7亚型禽流感病毒大约60KD蛋白特异性结合。11A5和11B2腹水HI效价均为15LOG2,ELISA效价分别为1:10~7和1:10~6。22C3和27C5腹水HI效价分别为8、12LOG2,ELISA效价分别为1:10~7和1:10~6。10B5和10C5腹水HI效价分别为13、14LOG2,ELISA效价均为1:10~7。20B6和16A1上清和腹水与H5N1和H7亚型禽流感病毒ELISA反应均阳性。腹水ELISA效价分别为1:10~6和1:10~7。