油菜菌核病拮抗菌株的筛选、鉴定及生防作用研究

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油菜菌核病是由核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)引起的一种重要病害,对我国油菜的安全生产照成了巨大的影响。目前,油菜菌核病的防治方法主要有农业防治、化学防治和生物防治,由于农业防治的操作方法繁琐、收到的效果欠佳,而化学防治会污染环境、使植株残留有毒物质,从而导致生物防治受到人们的青睐。筛选具有生防潜力的油菜菌核病拮抗菌株,可以有利于寻找新的生防菌株并为设计新的控制策略提供好的想法。因此,本研究从筛选高效拮抗菌株的基础上,对4株高效的拮抗菌株进行了室内平板试验和油菜活体试验来测定其对油菜菌核病菌的抑菌效果,并对抑菌效果最佳的BX-7进行了抗菌谱分析和鉴定,主要研究结果如下:  1.从油菜试验田中采集油菜根围土壤,通过平板稀释法分离出156株细菌菌株,经平板对峙法筛选得到10株对油菜菌核病菌具有较好抑菌效果的拮抗菌株,命名为BX-1~BX-10,利用继代培养测定抑菌效果复筛,选出4株遗传稳定性较好的菌株BX-1、BX-3、BX-4和BX-7,其中菌株BX-7的抑菌效果最佳,抑菌活性最稳定性。  2.通过平板对峙试验测定菌株BX-1、BX-3、BX-4和BX-7对油菜菌核病菌NGB4的抑制率分别为68.18%、67.72%、50.00%、77.27%。显微观察发现,与菌株BX-7对峙培养的菌核病菌菌丝发生变色,断裂,畸形等现象。  3.测定了菌株BX-1、BX-3、BX-4和BX-7的无菌发酵液对油菜菌核病菌的抑菌效果。结果显示:BX-1和BX-7的无菌发酵液对菌核病菌具有抑制作用,而BX-3和BX-4的无菌发酵液对菌核病菌无抑制作用;菌株BX-1和BX-7的培养96h的无菌发酵液的抑制效果最佳,对油菜菌核病菌菌丝生长的抑制率达到了17.86%和72.04%;菌株 BX-7的无菌发酵液对油菜菌核病菌的菌丝生长和菌核形成的抑制效果随无菌发酵液浓度的减少而降低。  4.测定了菌株BX-1、BX-3、BX-4和BX-7挥发性产物对油菜菌核病菌的抑菌效果。结果显示:菌株BX-1和BX-7的挥发性产物对油菜菌核病菌的菌丝生长具有较好的抑制作用,在培养48h后菌株 BX-1和BX-7对菌丝生长的抑制率分别为55.33%和74.09%;而菌株BX-3和BX-4的挥发性产物对油菜菌核病菌菌丝生长的抑制作用不显著。  5.测定了菌株BX-1、BX-3、BX-4和BX-7对油菜菌核病的离体叶片防效,并通过盆栽试验验证菌株BX-7的活体防效。结果显示:菌株BX-1和BX-7的菌悬液及无菌发酵液对油菜菌核病菌的抑菌效果极佳,对照叶片严重发病,而处理叶片未发病,其防效均达到了100%;菌株BX-3和BX-4的菌悬液对油菜菌核病菌均有一定的抑制作用,对照叶片严重发病,处理叶片轻微发病,其防效分别为73.12%和62.06%,而菌株BX-3和BX-4的无菌发酵液处理的叶片发病严重,对油菜菌核病菌无明显的抑菌效果。菌株BX-7的菌悬液及无菌发酵液能够有效降低叶片发病率,菌悬液的防治效果要显著优于无菌发酵液。结合室内平板试验和油菜活体试验,验证了菌株BX-7对油菜菌核病的生防潜力,具有巨大的研究价值。  6.分析菌株BX-7的抗菌谱,结果显示菌株BX-7对多种真菌病害的病原菌均具有抑菌效果,说明菌株BX-7具有广谱抗菌性。  7.通过菌株BX-7的形态学、生理生化特征鉴定以及16S rDNA序列的同源性分析,菌株BX-7被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus. subtilis)。
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