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第一部分 质粒Gap-LCR-ELISA法检测沙眼衣原体目的：建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)用以检测沙眼衣原体(Chlamydia Trachomatis, CT)。方法：采用定量的CT标准株原体(Elementary Body, EB)建立质粒Gap-LCR法并对扩增反应条件进行逐项优化，根据凝胶成像分析系统测定的目的条带光密度值(OD)确定可获得最大丰度产物的最佳反应条件。对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行优化后的Gap-LCR扩增并以ELISA检测反应产物，同时以PCR-ELISA作为方法学对照，以确定质粒Gap-LCR-ELISA法检测CT的特异度及灵敏度。结果：①优化后的质粒Gap-LCR扩增反应条件如下：每20μl反应体系(Mg2+浓度为10mmol/L) 用Tsc DNA ligase 5U和Taq DNA聚合酶3U，94℃预变性5分钟后进入主循环，94℃变性30秒，58℃退火连接120秒，共40个循环，可取得最佳的扩增效果。②质粒探针Gap-LCR-ELISA对6型CT均呈阳性反应，而鹦鹉热衣原体、淋球菌、解脲支原体、大肠杆菌、葡萄球菌和链球菌等均为阴性反应。③2.5个<WP=10>EB以上的Gap-LCR-ELISA均呈阳性反应，而PCR-ELISA仅能检测到25个以上的EB，即Gap-LCR-ELISA的敏感性较PCR-ELISA高 10倍。结论：质粒Gap-LCR-ELISA法具有极强的特异性，与其他种属衣原体及泌尿生殖道常见病原菌不发生交叉反应；灵敏度高，其检出水平为2.5个EB，可达到与美国Abbott IMxTm CT全自动系统相当的检测效能，在我国广大基层医疗单位具有极大的推广应用前景。