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目的高血压能够引起血管重构而影响靶器官的结构和功能,其主要原因可能是血管平滑肌细胞增殖/凋亡失衡,本实验仅利用免疫组织化学及蛋白印迹技术,对大鼠主动脉和肾脏细小动脉平滑肌细胞中磷酸化胞浆型磷脂酶A2(Phospho-cytosolic phospholipase A2 cPLA2 ),以及磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶-激酶(Phospho-extracellular Signal-regulated kinase kinase MEK)进行检测,旨在探讨高血压状态下血管平滑肌细胞的增殖/凋亡的调节机制。方法20只雄性自发性高血压大鼠(Spontaneously Hypertensive Rats SHR)分4周龄组、8周龄组、16周龄组、24周龄组,15只雄性Wistar大鼠(Wistar-Kyoto WKY)作为对照。采用组织病理学、形态测量学、免疫组织化学和Western blot分析,对比观察各组动物主动脉和肾脏细小动脉平滑肌细胞中cPLA2以及MEK的表达。结果1、血压变化:实验期间各周龄WKY动脉血压正常。SHR从8周龄开始血压升高, SHR8、SHR16、SHR24与同周龄WKY组相比组间有统计学差异(P<0.05)。2、心脏/体重比值的变化:各周龄WKY心脏/体重比值无显著性差异(P﹥0.05),相同周龄SHR心脏/体重比值较高并随周龄增加心脏/体重比值呈增高趋势。3、肾细、小动脉的变化: SHR细小动脉相对内径随周龄增加逐渐减小。4、磷酸化cPLA2的检测情况:SHR与WKY主动脉、肾细小动脉中磷酸化cPLA2阳性平滑肌细胞表现为细胞浆内有颗粒沉着,根据表达程度,颗粒颜色可呈棕黄色或淡黄色不等,随实验大鼠的组别和周龄不同其数量和范围也不同。在主动脉中的表达情况为:4、16、24周龄SHR分别为11.7%、46%、51.59%,而相同周龄WKY表达率分别为29.1%、36%、67.84%,可见随大鼠周龄增加,磷酸化cPLA2阳性率增加,同周龄SHR和WKY相比,SHR阳性表达率较低,且组间有显著性差异(P<0.00),SHR和WKY各自组内比较也有显著性差异(P<0.05)。肾细小动脉中磷酸化cPLA2的阳性率均较低且与主动脉的表达规律不同:4、8周龄SHR和4周龄WKY未见阳性表达,16、24周龄SHR和WKY相比,SHR阳性表达率较高;24周龄SHR和WKY均比16周龄的表达率高:叶间动脉SHR阳性率为17.5%、25.60%,WKY阳性率为6.64%、25.80%;弓形动脉SHR阳性率为13.20%、30.53%,WKY阳性率为3.68%、4.96%;小叶间动脉SHR阳性率为13.26%、28.18%,WKY阳性率为1.03%、5.77%;同周龄同级血管各组间比较均有显著性差异(P<0.00),Western blot检测也证明了这一结果。5、磷酸化MEK的检测情况:实验大鼠VSMC胞浆内有棕黄色颗粒沉着即视为阳性细胞,其在主动脉和肾细小动脉中表达规律基本一致:随大鼠周龄增高磷酸化MEK阳性率增高,且相同周龄的SHR与WKY相比,SHR阳性率较高且组间和组内比较均有有显著性差异(P<0.00)。4、16、24周龄SHR主动脉中阳性率分别为11.53%、54.74%、55.11%,同周龄WKY阳性率分别为24.45%、26.90%、45.90%;4、8、16、24周龄SHR叶间动脉阳性率为1.12%、3.29%、11.16%、29.76%,4、16、24周龄WKY阳性率分别为1.19%、3.32%、6.99%;SHR弓形动脉阳性率分别为0.69%、0.96%、7.44%、9.29%, WKY阳性率分别为0.37%、1.58%、2.83%;SHR小叶间动脉阳性率分别为0.91%、3.10%、5.10%、11.82%,WKY阳性率分别为2.97%、2.18%、11.59%;SHR入球动脉阳性率分别为5.01%、2.79%、5.02%、13.55%, WKY阳性率分别为0、3.17%、6.97%,应用Western blot检测也证明了这一结果。结论(1)高血压大鼠从8周龄血压开始升高,导致心脏肥大,并随周龄的增加逐渐加重;肾脏细、小动脉血管发生不同程度的管壁增厚、管腔狭窄。(2)在大鼠自发性高血压状态下,cPLA2对主动脉平滑肌细胞的调亡调节减弱,使细胞增殖活性增强,并促进间质胶原纤维增殖、聚集,导致大动脉重构,同时cPLA2促进肾细小动脉平滑肌细胞增殖,使肾细小动脉细胞数量增加而发生血管重构。(3)在大鼠自发性高血压发生发展过程中,由于ERK1/2上游激酶MEK的激活,导致ERK1/2激活,通过ERK1/2信号通路的激活,能够导致其下游分子cPLA2的磷酸化,从而减弱细胞增殖/凋亡活性,对血管重构的发生发挥调节作用。