【摘 要】
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目的:DNA是生物遗传信息的主要载体,其稳定性对于维持生物的机体健康具有至关重要的意义。它的功能异常及损伤会导致多种人类疾病。在各种类型的染色体损伤中,DNA双链断裂（DNA double strand break）的后果最为严重,不精确的修复会致使局部DNA序列改变,甚至染色体重排。DNA双链断裂的修复涉及多种信号转导途径,作为最上游的信号分子之一,共济失调毛细血管扩张突变基因（ataxia t
【基金项目】
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国家自然科学基金:R848对系统性红斑狼疮的免疫治疗作用与机制研究（8156060069）; 中国博士后科学基金:DNA损伤反应中UBQLN4调控自噬通路的功能及机制探究（2018M630480）
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目的:DNA是生物遗传信息的主要载体,其稳定性对于维持生物的机体健康具有至关重要的意义。它的功能异常及损伤会导致多种人类疾病。在各种类型的染色体损伤中,DNA双链断裂（DNA double strand break）的后果最为严重,不精确的修复会致使局部DNA序列改变,甚至染色体重排。DNA双链断裂的修复涉及多种信号转导途径,作为最上游的信号分子之一,共济失调毛细血管扩张突变基因（ataxia telangiectasia mutated,ATM）在双链断裂引起的DNA损伤反应中发挥着至关重要的作用,且ATM主要通过磷酸化下游蛋白发挥作用。本研究主要通过基于GFP competition assay系统的药物筛选方法筛选并提示批量的ATM潜在底物,并初步探究其中一个ATM底物ubiquilin4（UBQLN4）在间皮瘤发生发展过程中的作用。方法:1、利用基于GFP competition assay系统的药物筛选方法筛选并提示批量的ATM潜在底物。2、通过免疫共沉淀,Western blot等方法进一步确认UBQLN4是否为ATM底物。3、通过生物信息学分析及免疫组化实验探究UBQLN4在间皮瘤中的表达水平。4、通过克隆形成、CCK8、流式分析等方法探究UBQLN4对间皮瘤细胞克隆形成、凋亡及周期的影响。5、通过免疫共沉淀,Western blot等方法探究UBQLN4与BCL2蛋白家族的相互作用关系。6、通过免疫组化实验探究Bcl-2-related protein A（BCL2A1）、Bcl-2-like protein 10（BCL2L10）在间皮瘤组织中的表达水平。结果:1、筛选并提示出51个ATM潜在底物,确认UBQLN4为ATM磷酸化底物。2、UBQLN4在间皮瘤组织中高表达,并显著影响患者预后。3、敲减UBQLN4后,发现在诱导DNA损伤的情况下能显著增强间皮瘤细胞的凋亡,降低DNA损伤药物半致死浓度,而对间皮瘤细胞的周期无显著影响。4、UBQLN4通过与抗凋亡蛋白家族的成员BCL2A1及BCL2L10相互作用,增强其稳定性、进而调控间皮瘤细胞的凋亡。5、UBQLN4、BCL2A1及BCL2L10在间皮瘤组织中高表达,且BCL2A1、BCL2L10的表达水平与UBQLN4的表达水平呈正相关关系。结论:1、筛选并提示出51个ATM潜在底物,通过生化方法确认UBQLN4为ATM底物。2、UBQLN4在间皮瘤组织中高表达,并显著影响患者的生存期及预后。3、UBQLN4通过与抗凋亡蛋白BCL2A1及BCL2L10相互作用,增强其稳定性,进而调控间皮瘤细胞的凋亡。
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