【摘 要】
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随着分子生物学的迅猛发展,RAPD（随机扩增多态性DNA）标记技术已广泛应用于生物学诸多领域。本文应用RAPD技术对湘研十六号种子纯度进行了鉴定,并对RAPD技术的最适条件进行了探
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随着分子生物学的迅猛发展,RAPD（随机扩增多态性DNA）标记技术已广泛应用于生物学诸多领域。本文应用RAPD技术对湘研十六号种子纯度进行了鉴定,并对RAPD技术的最适条件进行了探讨。 分析了模板DNA的制备和反应组分对RAPD的影响。最终确定最佳反应体系为:总体系为25ul,模板DNA量为25～50ng,MgCl2浓度为2.0mmol/L,引物浓度为15～45ng,dNTP浓度为0.2mmol/L,Taq DNA聚合酶根据其活性为1.0～1.5U。反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性40s,37℃退火40s,72℃延伸90s,循环40次,再72℃后延伸7min。 鉴定和分析了品种真实性与亲本多态性。本文在筛选引物前进行了父母本以及F1代杂交种子品种真实性鉴定与亲本多态性分析,实验结果是:在利用S61,S1002引物鉴定父母本时,结果发现父母本的均一性好,在父本、母本各5粒种子内部之间的RAPD指纹图谱一样,均未发现假种子。 筛选出应用于黄瓜种子纯度鉴定的引物和建立了亲本及其杂交种子的RAPD指纹图谱。从100引物中筛选出了应用于黄瓜种子纯度鉴定的引物6条:偏母型引物（S10,S320）、偏父型引物（S61,S74）、互补型引物（S1002,S301）。利用S1002鉴定湘研十六号的纯度发现:发现父母本无其它种子混杂而在F1代杂交种子中发现2号,7号,36号,62号,65号为假杂种。 RAPD技术能够用来鉴定辣椒种子纯度,而且在建立其反应体系与反应程序后具有相当高的可靠性与准确性。
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