【摘 要】
：
该研究对临床分离的耐氟喹诺酮类(FQs)药物的沙门氏菌基因突变的分子机制进行研究,并初步建立了氟喹诺酮类药物耐药性检测错配PCR方法.实验选择了动物源、人源的对氟喹诺酮类
论文部分内容阅读
该研究对临床分离的耐氟喹诺酮类(FQs)药物的沙门氏菌基因突变的分子机制进行研究,并初步建立了氟喹诺酮类药物耐药性检测错配PCR方法.实验选择了动物源、人源的对氟喹诺酮类药物呈不同耐药程度的菌株和敏感菌株,分别提取各菌株的染色体DNA,并对gyrA基因和parC基因进行了聚合酶链式反应(PCR)和克隆测序.然后,应用计算机辅助软件WDNASIS对测序结果进行分析,以期确定国内动物源、人源耐药沙门氏菌gyrA基因和parC基因耐药突变特征,阐明沙门氏菌耐氟喹诺酮类药物的分子机制.最后根据突变位点附近的碱基序列来设计一系列灵敏度高的耐药检测引物,为快速进行耐药性的检测提供方法,为临床合理应用抗菌药提供理论基础.该课题研究内容分为3个部分.1.沙门氏菌临床耐药株及体外诱导耐药突变株的筛选.在临床广泛搜集沙门氏菌,并通过革兰氏染色法、沙门氏菌A-F多价血清玻板凝集试验及生化试验来进行鉴定.并对敏感菌株采用试管法在含亚抑菌浓度环丙沙星和恩诺沙星的药物压力下,与浓度递增相结合的方法进行耐药性诱导,筛选出8株耐药株.然后采用平板二倍稀释法测定沙门氏菌对环丙沙星、氧氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星、诺氟沙星、洛美沙星六种药物的最小抑菌浓度(MIC),发现氟喹诺酮类药物之间确实存在交叉耐药现象.筛选出8株临床高度耐药株(MIC>16μg/mL,以下均为对环丙沙星的最小抑菌浓度),29株低度耐药株(MIC介于0.125μg/mL和16μg/mL之间),23株敏感株(MIC<0.125μg/mL).2.耐氟喹诺酮类沙门氏菌gyrA基因和parC基因突变研究.提取沙门氏菌的染色体DNA,根据沙门氏菌gyrA基因和parC基因氟喹喏酮类药物耐药决定区(QRDR)外侧核苷酸序列设计引物,合成了两对引物A1和A2以及C1、C2,进行PCR扩增,其片断长度分别是347bp和413bp,凝胶电泳鉴定,均获得特异条带.分别回收各特异条带,并与pMD18-T载体连接,转化至JM109感受态细胞中,采用蓝白菌落筛选法,成功的筛选了阳性克隆,提取重组质粒进行EcoRⅠ和HindⅢ双酶切和PCR鉴定后,进行测序.3.根据耐药基因的突变位点,设计引物,建立错配PCR(mismatch-PCR)方法,进行耐药性突变位点的快速检测.mismatch-PCR技术首先要根据测序后已知的突变设计合适的引物,其次是优化PCR循环条件,最后通过电泳观察即可判读结果.为此,分别设计了6套引物来检测gyrA基因和parC基因发生的各种类型的突变,检测结果表明,此方法对野生型和突变型的单个碱基的差异能够进行区分,检测突变位点的检出率在96%(54/56)以上,这是国内外首次采用mismatch-PCR技术成功进行沙门氏菌耐药性检测,为快速筛选耐FQs沙门氏菌提供了快捷的方法.mismatch-PCR具有简单可靠、适用性广、花费低廉等优点,在未来耐药基因突变快速检测领域中可能发挥更大的作用.
其他文献
白沟地区12月玩具市场销售平稳,产品主要还是以遥控玩具、电动玩具、积木系列和娃娃为主。圣诞节和元旦市场礼品和生肖玩具新品不多,大部分商家也没有储备,所以此类玩具销售
现在的阳光总是覆着一层凉凉的伤感,也许是那时透支了温暖。——题记“吱呀——”听到这熟悉的声音,心狠狠地揪了一下。抬头,阳光下的一位老人,穿着薄得几近透明的汗衫,戴一
摘要：有效教学的核心思想是教学的效果，即什么样的教学是有效的？是高效的、低效的还是无效的？教学有没有效果并不是指的教师是否完成教学任务或者教师教学时是否认真，而是指的学生在教学的过程中是否真的学到东西了、学得好不好。如果学生对学习没有兴趣、或者是学生学习后没有收获，那么这种教学就是无效教学。同样如果学生在学习的过程中显得很辛苦，但是却收效甚微，那么这种教学效果就是低效甚至是无效的教学。从这里可以看
<正> 莫斯科大学新闻系系主任扎尔斯基教授撰文《电视应尊重所有人》,摘译如下: 老传统在记者们的身上随处可见,记者们竭力要在电视屏幕上尽
摘要：“学困生”的身上缺乏独立性、自信心、学习积极性和主动性及学习的目标性，久而久之，在学习上先是厌恶，而后放弃。严重地影响了后进生的智力发展，阻碍了“学困生”学习上的进步以及学习的兴趣。因此注重“学困生”的转化工作，对全面提高高中物理教学具有重要的意义。 关键词：高中物理 物理教学 “学困生” 目前的现状是高中物理教学两极分化现象日趋严重，厌学、怕学物理的“学困生”越来越多。如何激发学生的学
摘要：随着教育改革的逐步深化和素质教育的全面推进，面向全体学生、促使学生全面发展、促使学生主动地发展等全新的教育思想，日益深人人心，并体现在我们的教学行为、教学过程中。在这样的背景之下，为了更有效地提高受教育者的素质，培养受教育者的创新精神和实践能力，因材施教这一教学原则，重新受到人们的关注。在小学语文教学中如何实施因材施教？以下是我个人的一些肤浅看法： 关键词：小学语文 因材施教 一、因材施
摘要：思想品德课的中考复习，必须务实课本基础知识，用贴近学生生活实际的知识不断提高学生搜集、分析、处理信息的能力；必须有针对性的引导学生跨越式的强化知识间的内在联系；必须培养学生在真实情景中运用知识，多角度‘多层次，理解、分析、解决问题的能力；必须进行“开放式”训练，培养学生自主探究的创新意识和创新能力。只有这样做，才能掌握最基本、最重要、最常用的知识、能力和方法，才能获取中考主动权。 关键词：
摘要：运用数学知识解决实际问题是我们学数学的重要目的之一。随着新课程改革的深入，如何更好地培养学生运用数学知识解决实际问题的能力显得越来越重要。本文结合笔者多年的教学经验探讨了初中数学应用题教学的策略问题。 关键词：教学改革 应用题教学 一、应用题教学的重要性 运用数学知识解决现实中的实际问题是我们学数学的重要目的之一，初中数学大纲中指出：“要学生会应用所学知识解决简单的实际问题，能适应社会
每当我看到那空荡荡的兔子笼,“小馒头”在里面玩耍的身影就会浮现在眼前,心中一阵阵的后悔几乎让我窒息。小馒头是去年来到我家的。这只雪白的兔子长着一对闪亮的红眼睛,聪
摘要：以全面实施素质教育、培养学生创新能力和社会实践能力为具体目标，突出“以人为本、环境育人、和谐育人”的办学理念，创建优良的人文环境，使班级成为师生身心愉悦、情感陶冶的成长乐园，建设富有特色的和谐班级，是班级文化成为校园文化的基础；（1）加强学生前途理想教育，树立明确的奋斗目标；（2）建设一个良好的学习环境，使学生能够有效的进行学习，形成良好的学风、班风；（3）加强班级文化建设，使学生养成良好的