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目的:
体外培养人眼眶成纤维细胞,以培养的眶成纤维细胞为研究对象,观察己酮可可碱(PTX)对眶成纤维细胞增殖及分泌透明质酸(HA)的作用。
方法:
1.组织块法培养人眶成纤维细胞,观察细胞的生长状况及特性、HE染色了解其形态学特点,免疫组化染色鉴定细胞来源。
2.将培养的细胞以1×103/孔接种于细胞培养板中,10%胎牛血清的培养液培养48h,无血清培养液培养24h后,随机分组,设空白对照组及不同浓度(0.001、0.01、0.1、0.5、1mg/ml)PTX组,每组6个复孔。分别作用24、48、72小时后,观察细胞形态的变化,应用MTT比色法、放射免疫分析法观察不同浓度PTX对眶成纤维细胞增殖及分泌透明质酸的作用。
结论:
1.本实验成功培养出眶成纤维细胞。细胞传代稳定,为甲状腺相关眼病的研究提供了实验模型。
2.己酮可可碱可以抑制眶成纤维细胞的增殖及透明质酸的分泌,并且具有剂量依赖性和时间依赖性,为己酮可可碱的临床应用提供了理论依据。