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目的:通过体外实验的方法探讨RNA干扰下调瘦素的表达对体外培养的人病理性瘢痕成纤维细胞中TGF-β1表达、细胞增殖和I型胶原蛋白合成的影响,旨在研究下调瘦素对病理性瘢痕的防治作用。方法:(1)原代细胞培养:无菌条件下,将手术切除的增生性瘢痕和瘢痕疙瘩组织放入含有青、链霉素的DMEM培养液中漂洗,采用消化法培养成纤维细胞,取3--8代细胞用于实验研究。(2)CCK8测定细胞增殖:取对数生长期细胞,参照转染试剂说明书进行细胞转染,将培养板放在培养箱孵育相应的时间(0、24、48小时);向每孔加入10ul CCK-8溶液,将培养板在培养箱内孵育4小时,用酶标仪测定在450nm处的吸光度。(3)Real Time PCR测细胞mRNA:取对数生长期细胞,参照转染试剂说明进行细胞转染,转染后48小时,Trizol法抽提总RNA,按照反转录试剂盒说明进行cDNA的合成,合成cDNA后进行PCR扩增,检测瘦素siRNA对TGF-β1、I型胶原蛋白mRNA的影响。(4)Western blot测定leptin、TGF-β1、I型胶原蛋白的表达量。(5)采用SPSS17.0统计包软件,数值均以均数±标准差(?x土S)表示,组间计数资料用t检验。结果:(1)Real Time PCR结果:基因转染后,leptin mRNA在增生性瘢痕转染组、阴性对照组的表达分别为:0.72土0.17、1.01土0.16,转染组leptin mRNA相对表达量比阴性对照组明显减少(P<0.05),leptin mRNA在瘢痕疙瘩转染组、阴性对照组的表达分别为:0.48土0.15、1.01土0.21,转染组leptin mRNA相对表达量比阴性对照组明显减少(P<0.05);TGFβ1 mRNA在增生性瘢痕转染组、阴性对照组的表达分别为:0.64土0.07、1.01土0.19,转染组TGFβ1 mRNA相对表达量比阴性对照组明显减少(P<0.05),TGFβ1 mRNA在瘢痕疙瘩转染组、阴性对照组的表达分别为:0.63土0.17、1.02土0.29,转染组TGFβ1 mRNA相对表达量比阴性对照组明显减少(P<0.05);I型胶原mRNA在增生性瘢痕转染组、阴性对照组的表达分别为:0.72土0.15、1.00土0.11,转染组I型胶原mRNA相对表达量比阴性对照组明显减少(P<0.05),I型胶原mRNA在瘢痕疙瘩转染组、阴性对照组的表达分别为:0.57土0.09、1.02土0.29,转染组I型胶原mRNA相对表达量比阴性对照组明显减少(P<0.05)。(2)Western blot结果:基因转染后,增生性瘢痕转染组leptin、TGF-β1、I型胶原与GAPDH蛋白灰度值比均小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01);瘢痕疙瘩转染组leptin、TGF-β1、I型胶原与GAPDH蛋白灰度值比均小于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:增生性瘢痕及瘢痕疙瘩成纤维细胞可作为leptin siRNA转染的靶细胞,leptin基因可能是导致病理性瘢痕形成的重要基因。