从Src/VE-cadherin通路研究清利法调控湿热型创面修复的作用机制

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目的:  本课题着眼于控制湿热型创伤的炎症渗出进而促进术后创伤的修复,通过调节与炎症渗出密切相关的血管通透性,以影响血管通透性的两个主要因子SRC、VE-cadherin为主要研究对象,通过对Src/VE-cadherin信号通路施加外部干预,探索中药清热利湿外洗促进肛肠科痔疮手术术后创伤愈合的可能机制,以期发现更加有效地湿热型创伤的中药治疗方法。  方法:  本课题以实验用清洁级SD大鼠模拟复制人类肛肠科术后创伤模型,分别设立清热利湿外洗组、清热利湿外洗+PP2(src酶抑制剂)组、PP2组、生理盐水组、高锰酸钾组以及虎杖苷组,其中虎杖苷组为进一步验证组方中中药单体的作用而设立。通过肉眼观察、光镜等方法,观察清热利湿外洗法与传统临床外洗方法相较而言,前者在治疗后创面渗出、肉芽爬行以及愈合进程方面的改变。以影响血管通透性的两个主要因子SRC、VE-cadherin为主要研究对象。  运用HE染色观察创面上皮爬行、肉芽组织增生、胶原纤维、成纤维细胞、炎症细胞浸润、组织水肿等愈合及炎症情况。  运用伊文氏蓝染色实测不同愈合期各组创面肉芽组织血管通透性情况。  运用免疫组化及免疫荧光方法分析不同愈合时期各组创面肉芽中Src/VE—cadherin信号通路相关因子的蛋白表达及分布规律。  通过数据的整理分析,初步揭示清热利湿外洗通过Src/VE—cadherin信号通路调控微血管通透性,控制炎症,改善局部湿热、促进创面愈合的可能机制。  结果:  肉眼观察中可见,造模后第三天,在伤口愈合率方面,各组无明显差异。在控制伤口炎性渗出以及红肿程度方面,清热利湿外洗组及清热利湿外洗+PP2(src酶抑制剂)组效果最好且两组比较无统计学差异(P>0.05),虎杖苷组、PP2组其次,且均优于高锰酸钾组,生理盐水组最差。造模后第7天,伤口愈合率比较方面,清热利湿外洗组及清热利湿外洗+PP2(src酶抑制剂)组效果最好,且两组比较无统计学差异(P>0.05),高锰酸钾组、PP2组其次,且优于虎杖苷组,生理盐水组最差。造模后第7天,HE染色结果可见清热利湿组和清热利湿+PP2组肉芽组织无明显水肿,有丰富的新生毛细血管且成纤维细胞排列整齐;高锰酸钾组可见肉芽组织轻度水肿,视野可见少量中性粒细胞;生理盐水组肉芽组织呈中度水肿,中性粒细胞较多,新生血管最少。伊文氏蓝染色结果可见,高锰酸钾组、PP2组、清热利湿组和清热利湿+PP2组血管通透性均明显降低,差异具有统计学意义(p<0.05)。造模后第7天,免疫荧光结果显示,造模后第7天Src表达量结果可见,清热利湿组和清热利湿+PP2组的最低,而VE-cadherin的表达量最高(p<0.05),两组间比较均无统计学差异(p>0.05);生理盐水组则恰好与之相反,Src的表达量最高,VE-cadherin的表达量最低(p<0.05);高锰酸钾组、虎杖苷组的Src的表达高于清热利湿组和清热利湿+PP2组,低于生理盐水组(p<0.05),且VE-cadherin的表达低于清热利湿组和清热利湿+PP2组,高于生理盐水组(p<0.05),且三组间比较无统计学差异(p>0.05)。  结论:  实验结果表明,清热利湿法能够有效地降低血管通透性,减少创面组织水肿,控制创面炎性渗出,促进肉芽组织胶原纤维的合成,提高创面愈合率;同时能够有效促进创面组织中VE-cadherin的基因和蛋白表达,这可能是清热利湿药外洗控制炎症,改善局部湿热症状,促进愈合的分子基因机制。
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