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目的:研究大鼠β-防御素-1,2(β-defensin-1, 2, RBD-1, RBD-2)在牙周炎模型牙龈上皮及腮腺导管上皮的分布,探讨RBD-1、RBD-2在大鼠牙周炎发生、发展过程中的作用,从而为阐明防御素在牙周免疫防御中的作用提供初步的理论依据。方法:选用纯种6月龄雄性Wistar大鼠30只,随机分为三组:正常组、牙龈炎组、牙周炎组,每组各10只。牙龈炎和牙周炎组用直径0.2mm的正畸结扎丝结扎大鼠双侧上颌第一磨牙,并置于龈下。随机分为两组:结扎2周的为牙龈炎组,结扎6周的为牙周炎组。牙龈炎组大鼠于试验的第2周,牙周炎组和正常组大鼠于试验的第6周分别股动脉放血处死。取大鼠上颌骨连同牙及牙周组织、腮腺及其部分导管分别置于10%甲醛缓冲液固定48h,10%乙二胺四乙酸(EDTA)脱钙40d。乙醇梯度浓度脱水,石蜡包埋。将各组标本制成颊舌向4μm厚的组织切片,用SP免疫组化染色法分别检测观察三组大鼠牙周、腮腺及其导管中RBD-1、RBD-2蛋白表达情况。结果:1牙龈炎和牙周炎动物模型的建立1.1肉眼观察:大鼠结扎2周后,肉眼观察大鼠上颌第一磨牙牙龈呈暗红色,龈乳头和龈缘红肿,探诊出血,但未探及明显的牙周袋,故诊断为牙龈炎;当大鼠结扎6周后,除牙龈红肿,探之出血加重外,还可探及深牙周袋,故诊断为牙周炎。1.2 HE染色结果:1.2.1牙周组织的HE染色结果正常组:沟内上皮完整,有角化,角化程度较口腔龈上皮差,结合上皮位置正常,牙龈上皮无明显炎症细胞浸润,牙龈及牙周膜纤维排列有序、规律,牙槽骨边缘整齐,未见破骨细胞。牙龈炎组:沟内上皮完整,结合上皮位置正常,牙龈的纤维结缔组织水肿明显,其间有炎症细胞浸润,毛细血管数目增多、管腔扩张充血。上皮钉突数目增多,伸长,牙周膜纤维排列正常,牙槽骨边缘整齐,未见破骨细胞。牙周炎组:沟内上皮溃疡、坏死,结合上皮向根方增殖,上皮和固有层内有大量炎症细胞浸润,牙周膜纤维排列紊乱,毛细血管数目增多、管腔扩张充血,牙槽骨内可见破骨细胞。1.2.2腮腺的HE染色结果:正常组:管壁上皮细胞排列整齐,胞核圆形且较大,管腔内无炎症细胞浸润,导管周围及腺体内亦无炎症细胞浸润。牙龈炎组与牙周炎组腮腺组织表现与正常组相似。2免疫组化观察2.1牙龈组织中RBD-1、RBD-2的表达情况在正常组、牙龈炎组和牙周炎组口腔龈上皮和沟内上皮均可观察到RBD-1表达的棕黄色阳性染色颗粒,即RBD-1在三组中均有表达,阳性染色区域主要分布在上皮细胞的胞浆内。包括角化层、颗粒层、棘层,主要分布于棘层近颗粒层的细胞胞浆内,强染色区域呈带状或片状分布,基底细胞未见明显着色。与之相比,沟内上皮着色较浅。但在结合上皮、上皮下结缔组织及骨组织中未见到RBD-1表达。RBD-2的表达情况与RBD-1的表达情况相似,均只在上皮部位表达,结缔组织及骨组织未见表达。2.2腮腺导管中RBD-1、RBD-2的表达情况正常组、牙龈炎组和牙周炎组腮腺导管中均可观察到RBD-1表达的棕黄色阳性染色颗粒,即RBD-1均有表达,阳性染色区域主要分布在腮腺导管的上皮细胞的胞浆内,腮腺腺泡不着色。RBD-2的表达情况与RBD-1的表达情况相似。3半定量分析结果RBD-1在口腔龈上皮的阳性细胞计数在正常组、牙龈炎组和牙周炎组无明显差异(P>0.05)。在沟内上皮中,RBD-1在正常牙龈组的阳性细胞计数显著高于牙龈炎组和牙周炎组(P<0.05),而牙龈炎组和牙周炎组之间无显著性差异(P>0.05);三组中RBD-1在口腔龈上皮中的表达均明显高于沟内上皮(P<0.05)。RBD-2在口腔龈上皮的阳性细胞计数在牙龈炎组高于正常组和牙周炎组(P<0.05),正常组高于牙周炎组(P<0.05);在沟内上皮中,RBD-2在正常组的阳性细胞计数显著高于牙龈炎组和牙周炎组(P<0.05),而牙龈炎组和牙周炎组之间无显著性差异(P>0.05);三组中RBD-2在口腔龈上皮中的表达均明显高于沟内上皮(P<0.05)。RBD-1在腮腺导管上皮的阳性细胞计数在正常组、牙龈炎组和牙周炎组无明显差异(P>0.05)。RBD-2在腮腺导管上皮的阳性细胞计数在正常组、牙龈炎组和牙周炎组亦无明显差异(P>0.05)。结论:1.成功建立了大鼠牙龈炎、牙周炎的动物模型。2. RBD-1、RBD-2在正常及牙龈炎、牙周炎状态下的牙龈组织中都有表达,主要表达于口腔龈上皮,在沟内上皮有微弱表达,结合上皮、结缔组织及骨组织均无表达。3. RBD-1在正常及牙龈炎、牙周炎状态下的口腔龈上皮组织中都有表达,其表达强度无明显差异;RBD-2在正常及牙龈炎、牙周炎状态下的口腔龈上皮组织中亦都有表达,但在牙龈炎状态下表达强度明显升高,在牙周炎状态下表达强度显著降低。4. RBD-1、RBD-2在正常和牙龈炎、牙周炎状态下的腮腺组织中都有表达,主要位于腮腺导管上皮细胞,各组间无明显差别。