【摘 要】
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本论文以酶法转化绞股蓝皂苷为目的,对绞股蓝皂苷的分离、提取、绞股蓝皂苷糖苷酶产生菌种的发酵条件、绞股蓝皂苷糖苷酶的酶学性质三方面进行了研究。采用醇提法对绞股蓝皂
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本论文以酶法转化绞股蓝皂苷为目的,对绞股蓝皂苷的分离、提取、绞股蓝皂苷糖苷酶产生菌种的发酵条件、绞股蓝皂苷糖苷酶的酶学性质三方面进行了研究。采用醇提法对绞股蓝皂苷进行提取,提取液经石油醚脱脂、AB-8大孔吸附树脂脱糖后,制得绞股蓝总皂苷,提取率为2.43%。利用硅胶柱层析法对绞股蓝总皂苷进行了分离纯化,制得多糖基绞股蓝皂苷。以多糖基绞股蓝皂苷为底物,检验了8种菌所产酶对底物的水解能力,从中筛选出高产绞股蓝皂苷糖苷酶菌株Absida sp.GYP4r。发酵条件研究表明：菌种Absida sp.GYP4r在30℃下发酵培养6天所提取的酶液对底物的水解能力最佳。最佳诱导物为绞股蓝,最适诱导物浓度为20%。采用离子交换层析法对粗酶液进行了分离纯化,提纯酶用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳进行了纯度检测,确定其分子量约为67kDa。酶学性质研究表明：该酶酶反应的最适pH为5.0、在pH4.0～8.0范围内稳定：最适温度为30℃；在40℃以下稳定性较好；Na+、K+、Mg2+、Zn2+、Ca2+五种离子对该酶影响不大,Fe3+、Cu22+对该酶的酶活力有明显的抑制作用；酶反应动力学研究表明,Vmax为1.0mmol/(L·h), Km为32.76mmol/L。
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