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研究目的:本研究利用棕榈酸(Palmitate，PA)孵育C2C12肌管建立胰岛素抵抗细胞模型，在电刺激模拟神经冲动下，通过对电压、刺激频率、刺激时间的调节，刺激肌管产生收缩，避免了其它器官、组织和细胞的影响，观察收缩对胰岛素抵抗C2C12肌管糖转运能力的影响，为运动治疗骨骼肌细胞胰岛素抵抗提供一定的实验依据。 研究方法:以小鼠骨骼肌肌母细胞(C2C12)为研究对象，将细胞放置在37℃，5％ CO2+95％空气，饱和湿度的恒温培养箱中培养。当细胞生长至皿底95％时，换分化培养基。将分化5天的肌管饥饿12h（换1％BSA的低糖无血清培养液）后，分为0组，0.25组，0.5组，0.75组，1.0组，0+INS组，0.25+INS组，0.5+INS组，0.75+INS组，1.0+INS组，0组和0+INS组换2％BSA无酚红高糖DMEM，剩余组换PA梯度浓度培养液(浓度与组名相对应，分别为0.25，0.5，0.75，1.0 mmol/L)，0+INS组，0.25+INS组，0.5+INS组，0.75+INS组，1.0+INS组在PA孵育结束前30min加入100nmol/L的胰岛素孵育。16h后检测各组细胞培养液中葡萄糖剩余量，利用油红O染色，确定肌管内的脂质积累，MTT法检测PA浓度对肌管活性的影响，确定PA孵育的安全剂量。细胞培养液葡萄糖剩余量显著高于对照组，胰岛素刺激的糖吸收不明显，肌管内有明显脂质积累表明PA诱导的C2C12细胞胰岛素抵抗模型建立成功。模型建立后，将分化5天的C2C12肌管饥饿12h后分为对照组（C组）、电刺激组(ES组)、棕榈酸组（PA组）、棕榈酸+电刺激组（PA+ES组）。C组和ES组换2％BSA无酚红高糖DMEM，PA组和PA+ES组换浓度0.5 mmol/LPA培养液，4组同时孵育16h，孵育完后吸出废液，换电刺激液(4ml)，以15V，30ms，2Hz的强度电刺激ES组和PA+ES组60min,同时收样，测定细胞培养液葡萄糖剩余量、GLUT4细胞膜蛋白量、总蛋白量和AMPK-α2mRNA表达量。 研究结果:(1)0.5 mmol/L PA溶液孵育分化5天的肌管16h后，细胞培养液葡萄糖剩余量明显高于C组(P＜0.01)，MTT显示此浓度对肌管活性没有显著性影响(P＞0.05)。加入胰岛素孵育后，培养液葡萄糖剩余量与没有加入胰岛素的组相比没有显著性差异(P＞0.05)，说明由于PA的作用，肌管已对胰岛素产生耐受。(2) PA组培养液葡萄糖剩余量明显高于C组(p＜0.05)，ES组培养液葡萄糖剩余量明显低于C组(P＜0.05)，PA+ES组培养液葡萄糖剩余量略高于C组，与PA组相比明显下降(P＜0.05)。各组细胞培养液LDH活性均无显著性差异(P＞0.05)。(3)与C组相比，PA组AMPK-α2基因表达显著下降(P＜0.05)，ES组明显升高(P＜0.05)，60min电刺激后，PA+ES组AMPK-α2基因表达较PA组明显提高(P＜0.05)。(4) PA组肌管细胞膜GLUT4蛋白量与C组相比低29.14％(P＜0.01)，总蛋白量比C组低25.42％(P＜0.01)。ES组细胞膜蛋白量比C组高6.5％(P＜0.05)，总蛋白量比C组高3.3％，变化不明显(P＞0.05)。与PA组相比，PA+ES组肌管细胞膜GLUT4蛋白量高22.62％(P＜0.01)，总蛋白量有所增高，但无显著变化(P＞0.05)。 结论:(1)0.5mmol/L的PA溶液孵育分化5天的C2C12肌管16h，可以导致胰岛素抵抗的发生。(2)强度为15V，30ms，2Hz的电刺激作用于分化5天的C2C12肌管60min引起的收缩可以提高骨骼肌细胞对葡萄糖的吸收，适合做运动对肌管糖转运能力影响的研究。(3)电刺激PA诱导的胰岛素抵抗C2C12肌管60min，可以提高其AMPK-α2基因的表达，从而促进GLUT4的表达和转位，改善胰岛素抵抗的状态。为电刺激引起的收缩改善PA诱导的胰岛素抵抗的机制研究提供了新的细胞模型。