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目的:探讨食管鳞状细胞癌(ECa109)放射抗拒细胞株特征性蛋白指纹图谱,为进一步开展临床研究提供依据。方法:1.确定食管鳞状细胞癌细胞株ECa109的亚致死剂量射线。2.构建食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株模型。食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株ECa109-IR是用亚致死剂量放射线反复照射法获得的,ECa109-IR来源于食管鳞癌细胞株ECa109,是ECa109接受5次亚致死剂量射线后存活的第五代亚克隆细胞。3.检测食管鳞癌放射抗拒细胞株ECa109-IR的放射敏感性。克隆生存试验、细胞增殖试验和流式细胞术比较ECa109-IR和ECa109的放射敏感性。4.测差异蛋白谱——用蛋白指纹图谱技术检测放射抗拒细胞株ECa109-IR与放射敏感细胞株ECa109之间差异的蛋白谱。结果:1、建立食管鳞状细胞癌放射抗拒细胞株ECa109-IR。ECa109-IR为ECa109接受亚致死剂量射线反复5次照射后,存活的第五代亚克隆细胞株为放射抗拒细胞株ECa109-IR。2、ECa109-IR细胞的放射抗拒性分析。a.克隆生存实验结果显示ECa109-IR的存活克隆比ECa109的更大、数量更多,表现为放射抗拒。ECa109-IR的剂量存活曲线下降趋势比ECa109慢。从而证实ECa109-IR的放射抗拒性明显高于ECa109,ECa109-IR的放射抗拒性强。b.细胞增值实验射线对放射抗拒细胞株ECa109-IR的生长影响效应较小,射线照射后细胞恢复时间短、增长快。c.流式细胞术G0/G1的百分率:ECa109-IR和ECa109无明显差异,S期的百分率:ECa109-IR比ECa109高,G2/M期的百分率:ECa109-IR比ECa109低,表明ECa109-IR细胞放射诱导的G1/S和G2/M期阻滞的作用在明显弱于ECa109,这与典型的放射抗拒表型一致。该实验表明,放射诱导的细胞周期调节在放射抗拒细胞株ECa109-IR发生了改变。3.ECa109-IR和ECa109蛋白指纹图谱:ECa109-IR细胞和ECa109细胞的蛋白质荷比峰存在明显差异(P<0.05的差异峰为21个,P<0.01的差异峰为19个),差异峰的M/Z几乎均在6000以内,其中以M/Z在2000-6000最多见。以上显示ECa109-IR细胞和ECa109细胞蛋白图谱存在差异,即两者之间存在差异蛋白,这些蛋白极有可能为决定ECa109-IR和ECa109放射敏感性差异的原因。结论:放射抗拒ECa109-IR细胞和放射敏感ECa109细胞之间存在差异蛋白质荷比峰,也是ECa109-IR放射抗拒的原因,并为临床研究提供依据。