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目的:1.通过对瓜蒌子粉末特征物的观察,选取瓜蒌子中的石细胞为显微特征细胞,建立瓜蒌子的显微定量研究方法,从而测定10个产地中瓜蒌子石细胞的显微特征常数。2.通过对瓜蒌子中总三萜类成分提取工艺的优化,筛选出瓜蒌子的最佳提取条件,在此基础上分别对10个不同产地的瓜蒌子总三萜类成分进行含量测定,为瓜蒌子的质量评价及相关研究提供依据。3.采用高效液相色谱法,通过对10个产地的瓜蒌子指纹图谱的建立,以及对瓜蒌子中专属性成分栝楼仁三醇和栝楼仁二醇的含量测定,从而在定性和定量两个方面系统地建立瓜蒌子的质量评价体系,为瓜蒌子的质量控制提供依据。4.通过采用SPSS统计软件,研究瓜蒌子中总三萜类成分的含量与栝楼仁三醇、栝楼仁二醇的含量和石细胞的显微特征常数之间的相关关系,为多维度的评价瓜蒌子质量提供依据。5.通过对瓜蒌子不同溶剂提取物的制备,比较其抗氧化作用能力的强弱,筛选出瓜蒌子最佳抗氧化活性的提取溶剂,并探讨最佳提取溶剂的指纹图谱与抗氧化活性的相关性分析,为瓜蒌子合理的的开发应用提供参考。材料与方法:1.采用显微定量的方法测定瓜蒌子中石细胞的显微特征常数,通过SPSS统计软件建立总三萜类成分的含量与栝楼仁三醇、栝楼仁二醇的含量和石细胞的显微特征常数之间的数学模型,以确定其相关关系。2.通过Box-behnken响应面法优化筛选出瓜蒌子总三萜类成分的最佳制备工艺,采用紫外分光光度法测定瓜蒌子中总三萜类成分的含量。3.采用高效液相色谱法,以等度洗脱的方式测定瓜蒌子中栝楼仁三醇的含量。色谱柱:Agi Lent TC-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(93:7);流速1m L/min;柱温:30℃;检测波长:230nm;进样量10μL。4.采用高效液相色谱法,以等度洗脱的方式测定瓜蒌子中栝楼仁二醇的含量。色谱柱:Agi Lent TC-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为纯甲醇;流速1m L/min;柱温:30℃;检测波长:239nm;进样量10μL。5.采用高效液相色谱法,以梯度洗脱的方式建立瓜蒌子的指纹图谱。色谱柱:Agi Lent TC-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相A为乙腈,流动相B为0.1%的磷酸水;流速1m L/min;柱温:30℃;检测波长:230nm;进样量10μL。6.采用回流提取法分别以水、无水乙醇为提取溶剂,在80℃水浴条件下进行瓜蒌子水提物和醇提物的制备;采用超声提取法以二氯甲烷为提取溶剂进行瓜蒌子二氯甲烷提取物的制备;然后分别对三种瓜蒌子提取物进行抗氧化活性的测定比较。采用高效液相色谱法,建立瓜蒌子水提物的指纹图谱,并研究其指纹图谱与抗氧化作用的相关性。结果:1.在10个产地中,瓜蒌子中石细胞的显微特征常数差异较大:其中10号产地(安徽商丘)的显微特征常数最大,为458.8个/mg,4号产地(河北辛集)的显微特征常数最小,为115.3个/mg。2.瓜蒌子总三萜类成分的最佳制备工艺为料液比40:1,超声时间20min,超声功率100W;测得10个产地间,瓜蒌子中总三萜类成分的含量存在明显的差异,其中总三萜类成分含量最高的是9号产地(安徽亳州),为45.71mg/g,而7号产地(山东)的总三萜类成分含量最低,为15.22mg/g。3.在10个产地中,栝楼仁三醇的含量差异较小:其中河北安国的栝楼仁三醇含量最高,为1.455mg/g,河南的栝楼仁三醇含量最低,为0.948mg/g;栝楼仁二醇的含量差异较大:其中河北定州的栝楼仁二醇含量最高,为0.0967mg/g,山东的栝楼仁二醇含量最低,为0.02260mg/g。通过建立10个产地瓜蒌子的HPLC指纹图谱,共确立了13个色谱共有峰,其中13号峰为对照品栝楼仁三醇的色谱峰。各个产地瓜蒌子HPLC指纹图谱的相似度均大于0.941。4.以不同产地瓜蒌子中石细胞的显微特征常数为因变量,与之对应的栝楼仁三醇含量为自变量,可得两者之间的线性回归方程为Y=-449.517X1+830.56,r=0.657;以不同产地瓜蒌子中总三萜类成分的含量为因变量,与之对应的栝楼仁三醇含量为自变量,可得两者之间的线性回归方程为:Y=49.511X1-29.031,r=-0.753;以不同产地瓜蒌子中总三萜类成分的含量为自变量,与之对应的栝楼仁三醇和栝楼仁二醇的含量为因变量,可得两者之间的回归方程为:Y=44.018X1+199.914X2-34.970,r=-0.873;瓜蒌子的其他数量模型之间不存在相关关系。5.瓜蒌子中不同溶剂提取物的总三萜含量相差较大,水提物、醇提物、二氯甲烷提物的总三萜含量分别为12.72mg/g、18.24mg/g、30.85mg/g,而其抗氧化活性顺序为水提物>醇提物>二氯甲烷提物。瓜蒌子水提物中的11、9、6、12、3、4、14、10号峰,这8个色谱峰清除DPPH和ABTS自由基的VIP值均大于1,说明这几个色谱峰在瓜蒌子水提物中发挥抗氧化的主要作用。结论:1.10个不同产地的瓜蒌子石细胞显微特征常数存在一定的差异,由此可作为区别不同产区瓜蒌子药材质量的依据。该方法稳定可靠,为定性鉴别不同产区的瓜蒌子药材以及石细胞显微定量标准的制定提供依据,还为显微特征常数与化学成分之间的相关分析奠定基础。2.Box-behnken响应面法优化瓜蒌子中总三萜类成分含量测定的方法合理可行,可用于瓜蒌子中总三萜类成分的含量测定。10个不同产地间,瓜蒌子中总三萜类成分的含量存在明显的差异,可将总三萜类成分的含量作为瓜蒌子质量标准含量测定项下的测定指标。3.栝楼仁三醇和栝楼仁二醇作为瓜蒌子的专属性成分,两者可作为瓜蒌子在质量定量控制方面的两个要指标。建立的瓜蒌子HPLC指纹图谱,可为瓜蒌子在定性鉴别方面提供科学依据。4.瓜蒌子中石细胞的显微特征常数与栝楼仁三醇含量呈显著的负相关;瓜蒌子中总三萜类成分的含量与栝楼仁三醇含量呈显著的正相关;瓜蒌子中总三萜类成分含量与栝楼仁三醇和栝楼仁二醇的含量有显著的相关性,且均呈正相关;以上相关性均具有显著的统计学意义;该方法稳定可行,在显微定量方面为瓜蒌子的质量制定提供了新方法、新手段。并为瓜蒌子质量标准的制定提供了依据。5.在瓜蒌子的三种提取物中,水提物的抗氧化活性最强,瓜蒌子中抗氧化活性的主要成分不是三萜类成分。