河南省猪2型圆环病毒分子流行病学调查

• 作 者: 彭志锋
• 机 构: 河南农业大学
• 出 处: 河南农业大学
• 发表日期: 2009年期
• 关键词: 猪2型圆环病毒 河南株 分离 鉴定 全基因组 序列分析

猪2型圆环病毒(Porcine circovirus type 2,PCV2)不仅是仔猪断奶多系统衰竭综合征的主要病原体,而且还引起一系列圆环病毒相关疾病(porcine circovirus-associated disease,PCVAD)。PCV2能够使感染猪免疫功能受到损害,这种可导致机体免疫抑制的病毒经常以亚临床感染的形式出现,常易被忽视。因此应当进一步加强对PCV2的流行病学研究。为了了解PCV2在河南省猪群中的感染情况以及PCV2河南株的起源和遗传变异,本研究采用PCR诊断技术对所收集的361份疑似猪圆环病毒相关疾病的病料进行检测,得到256份PCV2阳性病料,并用其中的部分病料进行了PCV2的分离、增殖。PCR检测结果显示2007～2008年河南猪群中PCV2总体阳性率高达70.9%。采用反向PCR技术,从河南省不同地区临床表现不同的病猪中扩增、克隆了11株PCV2的全基因组,对其进行了序列测定,得到长度为1767 bp的目的基因片段。应用PHYLIP和CLUSTALX分析软件,使用Boot-strapped Neighbor-Joining算法,基于51株PCV(49株PCV2和2株PCV1)全基因组序列进行比较,并生成系统进化树。结果表明PCV2在该进化树主要分为两大群:美国群和欧洲群,但是PCV2各分离株之间存在着某种地理区域上的相关性。河南株之间以及与中国其他地区PCV2流行株同源性均很高(98.1%～99.7%);河南株均处于欧洲分支中。提示PCV2河南株可能起源于欧洲株;河南省不同年份的PCV2中确实存在一定的基因差异(98.0%～99.7%),但PCV2全基因组从总体上来说遗传进化相对稳定;河南省猪群中的PCVAD不是由PCV2变异毒株引起的。应用DNAStar序列分析软件对所测定的11株PCV2序列进行同源性分析。结果显示,11株之间的核苷酸同源性为98.0%～99.7%。进一步分析三个主要阅读框ORF1、ORF2和ORF3并推导其氨基酸序列,河南株ORF1的核苷酸及氨基酸序列的同源率分别为97.0%～99.8%和96.5%～99.7%:河南株ORF2之间的核苷酸及氨基酸同源率分别为98.9%～100%和97.9%～99.6%。Cap蛋白氨基酸变异大于Rep蛋白,与国外己发表毒株的ORF2比较,发现变异主要发生在三个区域,其中两个与病毒的抗原表位相对应,推测这些变异可能与PCV2抗原性的改变有关,而Rep蛋白非常保守,这与其功能有关。河南株ORF3之间的核苷酸及氨基酸同源率分别为97.1%～100%和84.8%～99.0%,表明ORF3蛋白氨基酸变异较大,推测这些位点可能与PCV2的致病力有关。