论文部分内容阅读
高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的应用，极大的降低了AIDS发病率和死亡率，延长了HIV感染者的生命。但HIV耐药在很大程度上影响了HAART的疗效，耐药株的产生成为影响抗病毒治疗效果的主要因素。欧洲、美国的耐药监测技术规范均推荐在新感染未经抗病毒药物治疗的患者中进行原发耐药检测。我国政府于2003年底出台了艾滋病治疗的“四免一关怀”政策，陆续在全国范围内开展了大规模的免费抗病毒治疗，监测我国未经抗病毒药物治疗HIV-1感染者中的耐药情况可以为制定合理的用药方案和减少耐药毒株出现提供科学依据。
根据世界卫生组织(WHO)的“HIV耐药监测指南”，无偿献血者中的HIV-1感染者，可以认定为HIV新诊断未治疗人群。分析了云南无偿献血者的血浆和外周血单核细胞(PBMC)，研究云南无偿献血人群的耐药状况。
已有实验室血清学方法识别HIV-1新近感染和长期感染，用BED-CEIA方法，在河南、安徽、山西自愿咨询检测(VCT)人群中检出新近感染人群，进行耐药基因研究，对照研究了部分长期感染人群。
样品提取核酸后，巢式聚合酶链反应(nested-PCR)扩增pol基因区(含蛋白酶区1～99氨基酸全长和逆转录酶区1～242氨基酸)。PCR产物双脱氧法测序，所得序列与洛斯阿拉莫斯HIV核酸序列库(Los Alamos HIV Database)标准株构建系统进化树分析亚型；用斯坦福大学耐药数据库(Standford HIV Drug ResistanceDatabase)分析耐药。
研究发现，云南省2005～2006年无偿献血者中，有52例为HIV-1阳性，其中49例血浆和相应的PBMC样品病毒基因扩增成功。序列分析表明，HIV病毒的亚型分布为CRF08_BC(51.0％)，CRF07_BC(24.5％)，CRF01_AE(20.4％)和B(4.1％)；所有样品均未发现蛋白酶抑制剂(PI)耐药基因位点主要突变，只在6例(11.7％)样品中发现7例次P1次要耐药位点突变；另外，在9例(18.4％)样品中发现10例次核苷类逆转录酶抑制剂(NRTI)耐药突变，1例(2.0％)发生非核苷类逆转录酶抑制剂(NNRTI)耐药突变；针对具体药物PI/NRTI/NNRTI均只有1例有潜在的低度耐药，临床仍对药物敏感。PBMC和血浆的病毒耐药没有显著差异。
从河南、安徽、山西27个VCT检测点2006～2007年采集的10310例样品中，通过WB和BED-CEIA检测出新近感染人群63例，分析成功50例血浆样品；河南VCT长期感染样品中随机抽样，分析成功19例样品。分析成功的69例VCT样品中，HIV病毒株的亚型分布分别为B(95.7％)，CRF01_AE(2.9％)和C(1.4％)。上诉样品均未检出PI主要耐药相关突变，只在26例(37.7％)样品中存在27例次PI次要耐药相关突变；3例(4.3％)样品出现6例次NRTI耐药相关突变，7例(10.1％)样品出现8例次NNRTI耐药相关突变。通过与斯坦福大学耐药数据库比对，没有发现针对PI类药物的临床耐药；但有2例(2.8％)针对NRTI类药物耐药，1例有M184V突变导致对拉米夫定(3TC)和氟代拉米夫定(FTC)高度耐药；1例样品存在T215Y、M41L、L210W三重突变位点，对阿巴卡韦(ABC)、去羟肌苷(ddI)和坦那夫韦(TDF)中度耐药，对齐多夫定(AZT)和司他夫定(d4T)高度耐药；针对NNRTI类药物，有3例(4.3％)毒株有耐药，1例有K103N突变导致对奈韦拉平(NVP)、地拉韦啶(DLV)和依菲韦伦(EFV)的高度耐药；1例有Y188L突变导致对NVP和EFV的高度耐药；1例存在K101E和G190A双重突变，导致对NVP的高度耐药，对DLV、EFV和依曲韦林(ETR)中度耐药。
比较长期感染和新近感染者之间的亚型和耐药，未发现显著差异。
研究结果表明，云南、河南和安徽未经治疗HIV-1感染者中耐药处于低流行状态。亚型分布云南无偿献血者以CRF BC为主，河南、安徽VCT人群以B为主。应持续在未经治疗人群中进行耐药监测。