【摘 要】
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实验目的观察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)和IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及持续时间,研究其抗弓形虫感染的能力,探讨STAg和IFN-
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实验目的观察可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen, STAg)和IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导的黏膜和系统免疫应答及持续时间,研究其抗弓形虫感染的能力,探讨STAg和IFN-γ滴鼻免疫诱导的免疫应答机制,为鼻内弓形虫复合疫苗的研制提供实验依据。实验方法本研究分三部分:第一部分观察鼻内给予IFN-γ对小鼠的抗弓形虫感染的保护作用。将6～7周龄BALB/c小鼠45只随机分为3个组,每组15只,分别经口感染弓形虫速殖子前或后鼻内给予IFN-γ或感染前鼻内给予注射用水(对照组),观察小鼠健康状况及死亡情况,在感染后第30天处死小鼠,计数肝、脾、脑组织内弓形虫速殖子。第二部分观察IFN-γ作为佐剂的弓形虫STAg疫苗免疫效果。将5～6周龄雌性BALB/c小鼠45只随机分为3个组,分别用20μg STAg、20μg STAg+1000U IFN-γ鼻内免疫小鼠2次,对照组用等量PBS滴鼻,间隔14天。末次免疫后第10天,用RH株弓形虫速殖子4×104个/只灌胃攻击,逐日记录小鼠体重,观察小鼠存活情况。攻击后第43天处死全部小鼠,分离计数脑、肝组织速殖子;计数IEL、PP结和脾T淋巴细胞;ELISA法检测小鼠鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液、粪便中弓形虫特异性IgA和血清IgG抗体。第三部分观察STAg抗原联合IFN-γ佐剂滴鼻免疫小鼠诱导黏膜及系统免疫应答持续时间。将BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实验组以STAg(20ug/只)为抗原、IFN-γ(1000U/只)为佐剂滴鼻免疫,对照组以PBS滴鼻。滴鼻2次,间隔2周,分别于未免疫时、首次免疫后第2周、加强免疫后第2、4、6、8、10周处死小鼠。ELISA法测定血清及鼻咽、肺、肠冲洗液IgA、IgG变化;称取胸腺、脾脏重量;分离脾、肠上皮内淋巴细胞(intestinal intraepithelial lymphocytes, IEL)并计数。结果第一部分小鼠感染前和感染后鼻内给予IFN-γ,存活率(P>0.05)和体重(P<0.01)高于对照组,肝、脾、脑中速殖子的数量显著低于对照组(P<0.01)。第二部分STAg+IFN-γ组小鼠存活率显著高于STAg组和对照组(P<0.05);脑、肝组织内速殖子虫荷比STAg组和对照组显著减少(P<0.01);IEL、PP结和脾T淋巴细胞都发生了显著增殖性应答,与STAg和对照组相比增生明显(P<0.05);鼻咽冲洗液、肺冲洗液、阴道冲洗液弓形虫特异性IgA显著增高,显著高于对照组(P<0.05);血清IgG抗体显著高于STAg和对照组(P<0.01)。第三部分实验中小鼠胸腺重量减轻,但组间无差异。小鼠脾脏在首次免疫后第2周和
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