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目的:测定瑞香狼毒药物血清对人肝癌细胞SMMC-7721生长的抑制作用以及对VEGF和Survivin表达的影响,探讨其诱导人肝癌细胞凋亡的机制。
方法:本实验用SMMC-7721作为瑞香狼毒药物血清体外作用的模型,SMMC-7721,按常规细胞培养方法进行培养,以不同浓度和不同时间采集的瑞香狼毒药物血清处理SMMC-7721细胞24h和48h时,用MTT法观察瑞香狼毒药物血清对SMMC-7721的增殖抑制作用,用光学显微镜观察SMMC-7721的形态变化,用流式细胞仪观察SMMC-7721细胞周期的变化,用Westem blot检测瑞香狼毒药物血清作用SMMC-7721细胞24h时SMMC-7721内最小生存素和血管内皮生长因子蛋白表达的改变。
结果:瑞香狼毒药物血清可明显抑制SMMC-7721的增殖,这种抑制效应在每个浓度2h采集的瑞香狼毒药物血清作用最明显,且在作用24h时与药物浓度呈正相关,而在48h没有显示出明显的剂量依赖性。
光学显微镜下观察发现SMMC-7721在瑞香狼毒药物血清作用下细胞形态发生了明显变化,SMMC-7721出现凋亡现象,有凋亡小体形成。
流式细胞术分析显示,瑞香狼毒药物血清作用24h可明显诱导SMMC-7721细胞被阻滞在G1期S期细胞减少,并且在2h采集的瑞香狼毒药物血清作用更为明显,表现出剂量依赖性,48h有此变化但效果不如24h明显。
以上三个实验结果显示,2h采集的瑞香狼毒药物血清药效最好并呈现出剂量依赖性,故进行Western Blot实验时只是针对性地选择了五个浓度,即3g/kg、6g/kg、9g/kg、12g/kg和对照组。结果显示SMMC-7721中可以检测到VEGF和Survivin蛋白的表达,说明瑞香狼毒药物血清可以下调VEGF和Survivin蛋白的表达。
结论:瑞香狼毒药物血清能明显抑制SMMC-7721增殖,表现出剂量依赖性,而且以2h采集的瑞香狼毒药物血清作用最为明显,瑞香狼毒药物血清可能通过下调VEGF和Survivin蛋白的表达而促进SMMC-7721的凋亡。