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目的: 我们经过查阅文献得知HCRP1和DLL4蛋白与两个通路密切相关，但与胃癌侵袭和转移等生物学行为的关系尚不明确。本论文拟研究这两个关键蛋白对胃癌细胞多种生物学特性的作用机制，进一步探索EGFR和Notch-1通路对胃癌恶行性的影响。 方法: 1.采用免疫组化方法分析HCRP1在137例胃癌组织及10例正常胃组织中的表达情况;采用单因素回归分析、Cox多因素回归、生存曲线和Log-rank检验等方法对HCRP1与临床病理指标及预后的关系进行分析和检验。 2.Western blot筛选HCRP1高表达和低表达的胃癌细胞系;通过HCRP1质粒过表达以及敲除建立两组互为对照的胃癌细胞模型，应用MTT和集落形成实验分析HCRP1表达的变化对细胞增殖能力及细胞对顺铂的药物敏感性产生的影响。3.利用流式细胞术检测经顺铂处理的两组细胞凋亡水平的变化。Transwell实验探究HCRP1表达对于细胞侵袭能力所发挥的作用。应用Western blot实验技术检测HCRP1蛋白对细胞周期以及侵袭相关蛋白表达水平的影响。 4.采用免疫组化方法检测了DLL4和Nestin蛋白在383例胃癌标本组织中的表达。利用卡方检验、单因素回归分析和Cox多因素回归分析DLL4的表达与胃癌临床病理特征的关系及DLL4的表达与Nestin之间的联系。采用K-M法及Log-rank检验分析DLL4和Nestin的表达与胃癌患者预后的关系。 5.筛选高表达DLL4的胃癌细胞，通过细胞转染技术建立KATO、KATO-shDLL4及KATO-NC三组互为对照的细胞系。利用流式细胞术检测DLL4对干/祖细胞表面标志物Nestin和Lgr5表达变化的影响;分选出三组细胞的侧群细胞，利用克隆形成和MTT实验检测DLL4对胃癌干/祖细胞增殖能力的影响，血管生成结合趋化实验分析DLL4对胃癌干/祖细胞局部微血管生成及细胞迁移能力的影响。 6.肿瘤球形成实验分析DLL4对胃癌干/祖细胞自我更新能力的影响，利用免疫荧光共聚焦技术检测肿瘤球中DLL4和干/祖细胞分化相关标志物mucin5AC的表达差异。 7.通过western blot和免疫荧光共聚焦染色实验检测DLL4和DAPT抑制剂对胃癌干/祖细胞内活性蛋白NICD-1表达的影响，通过RT-PCR实验分析DLL4对Notch-1通路相关配体及靶蛋白表达的影响，transwell实验分析DLL4对胃癌干/祖细胞细胞侵袭能力的影响，MTT检测DLL4影响胃癌干/祖细胞对5-FU的药物抵抗性，利用流式细胞术分析DLL4对胃癌干/祖细胞凋亡的影响。 8.动物实验分析DLL4对裸鼠腹腔内成瘤率的影响。 结果: 1.HCRP1在胃癌组织中的表达情况及临床意义 2.HCRP1高表达抑制胃癌细胞增殖和侵袭能力，并提高胃癌细胞对顺铂的药物敏感性 3.HCRP1在胃癌细胞中通过EGFR-AKT通路发挥调控作用 4.胃癌患者DLL4与肿瘤干/祖细胞相关蛋白的表达情况及预后密切相关 5.KATO细胞内抑制DLL4的表达会降低胃癌干/祖细胞比率 6.敲除DLL4表达可以降低胃癌干/祖细胞自我更新能力并且提高其多重分化的能力 7.敲除DLL4表达可以抑制胃癌干/祖细胞Notch-1信号通路的活性 8.敲除DLL4表达可以降低胃癌干/祖细胞在裸鼠体内的成瘤能力 结论: 1、HCRP1在胃癌组织中存在低表达，并与TNM高分期、淋巴结转移和患者的预后不良显著相关。 2、HCRP1高表达能够降低胃癌细胞的增殖、侵袭能力及对顺铂的药物抵抗性。 3、胃癌细胞中HCRP1通过EGFR-AKT实现对Bcl-2表达量的调控，通过EGFR-ERK实现对MMP2表达量的调控，进而对细胞增殖和侵袭的能力产生影响。 4、DLL4在胃癌组织内存在高表达，且与淋巴结转移率、远处转移和预后不良密切相关。 5、DLL4影响胃癌干/祖细胞自我更新、增殖、分化、侵袭转移、药物抵抗性和成瘤性等干细胞特性。 6、DLL4在胃癌内对上述干细胞特性的影响是通过调控Notch-1通路实现的。