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目的：恶性肿瘤的发生、发展可能是人类最为复杂的疾病过程之一,众多细胞与分子机制已获阐释,树突状细胞(dendritic cell,DC)功能障碍被证明是导致恶性肿瘤免疫缺陷／逃避(immune deficiency/escape)的重要原因之一。树突状细胞是功能最强大的抗原递呈细胞,广泛存在于多种器官和组织中,其在行使和完成功能的过程中需要游走迁移,最终到达淋巴结富集区,激活初始T细胞,引起机体免疫反应,杀伤、消灭肿瘤细胞和炎症分子。正是由于DC具有如此强大的功能,DC被修饰成各种肿瘤疫苗用来增强消灭肿瘤的能力。因此各种DC肿瘤疫苗的研究已成为热点,现已完成多项随机临床试验,但其疗效报道不一并常表现有发热等副作用,有待进一步探讨和完善。然而在DC或DC疫苗发挥作用及游走过程中,趋化因子等细胞分子始终发挥着调节、促进或抑制的作用。其微妙关系非常复杂。本实验探讨K-ras突变多肽致敏树突状细胞对趋化因子CCL19.CCL22和细胞骨架蛋白Fascin-1表达的影响,为临床应用K-ras突变多肽树突状细胞肿瘤疫苗提供理论基础。方法：无菌抽取健康志愿者外周血25ml,用2.5ml肝素抗凝,用淋巴细胞分离液分离获得单个核细胞,RPMI-1640洗涤2次,将细胞放入含有体积分数10%的人AB型血清RPMI-1640中稀释到2×106／ml,加入6孔培养板中,37℃、5%C02培养2小时,贴壁细胞用pH7.0的RPMI-1640洗涤3次,洗去非贴壁细胞。在培养板中加入含RPMI-1640.10%胎牛血清、rhGM-CSF1000u/ml.IL-4 500u/ml的培养液,隔天半量换液培养7天。在培养的第7天,收集细胞(1×106／m1)并分组,A组为未负载的DC,加入RPMI-1640(50μg／ml)为对照；B组加入K-ras突变抗原多肽(50μg／m1),24小时后两组细胞各加入TNF-α(10ng/ml),分别继续诱导2天。两组细胞经流式细胞仪测定细胞表型CD1a、CD80、CD86的表达,并分别通过倒置显微镜、扫描电镜、透射电镜观察其形态结构,酶联免疫吸附试验(ELISA)法实时(加入K-ras前、加入K-ras后6h、12h、24h、48h)测DC培养上清液中IL-12、CCL19和CCL22的表达含量(吸光度)以及Western blot法测定细胞骨架蛋白fascin-1的表达。结果：K-ras突变多肽负载DC后,负载组细胞能够高表达CD1a、CD80、CD86,未负载组和负载组细胞CD1a、CD80和CD86的平均表达率分别为:38.1%、64.3%、61.4%和70.2%、90.5%、91.6%,两组细胞的表达有显著统计学意义(P<0.01)。各镜下细胞形态结构发生很大变化：未负载组DC.树突状突起比较短、而且稀少；负载组DC:细胞突起粗细不等、长短不一、形态差别很大,有的呈树枝状,有的呈花瓣状,透镜下细胞核清晰,内质网发达。两组细胞表达的细胞因子IL-12、CCL19、CCL22在K-ras突变多肽负载前表达水平几乎一样(P>0.05)；负载后负载组细胞各个时间点细胞因子的表达水平均高于未负载组细胞表达水平,差异有统计学意义(P<0.01),随着时间的延续,未负载组的表达水平增加不明显,而负载组随时间的持续,表达水平明显增高,呈上升趋势,并且每不同两个时间点的表达水平之间有显著地统计学意义(P<0.01).Western blot结果：细胞骨架蛋白的表达分泌水平经Lab-wiok4.6专业软件分析条带灰度两组间具有显著的统计学意义(P<0.01)。结论：K-ras突变多肽能够促进DC成熟,并使细胞因子和细胞骨架蛋白表达水平增加,能够增强DC游走迁移,从而增强杀伤细菌或肿瘤细胞的能力。K-ras突变多肽负载DC可以作为一个树突状细胞肿瘤疫苗,为以后的研究奠定基础,进而用于临床。