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布鲁氏菌病brucellosis)是人类与畜禽以及野生动物之问自然传播的人兽共患传染病,但是人与人之间几乎不传染。布鲁氏菌病在家畜中牛,羊,猪感染的情况较多,可通过饮用水及分泌物传染给人类和其他家畜。患病家畜会引起生殖器官和胎膜发炎,导致流产、不育和各种组织的局部病灶等临床症状。随着布鲁氏菌病存世界各地蔓延,已经有超过100个国家报道了该病的流行,尤其是在贫穷落后的发展中国家,由于对养殖业的重视程度较低以及养殖技术落后,布鲁氏菌发病情况更为严重。近几年来,布鲁氏菌病在延边州的流行区域逐渐扩大,发病率和感染率不断上升,已成为严重威胁延边黄牛产业发展的重要疫病之一,因此,分离布鲁氏菌本地株、建立检测方法以及疫苗的研究是十分必要的。为了分离鉴定布鲁氏菌延边株,以及预防布鲁氏菌在该区的流行,本试验利用牛流产的胎衣分离出一株布鲁氏菌,并应用布鲁氏菌选择性培养基、H202试验、尿素酶氧化试验、尿素酶试验等生化鉴定,以及进行姬姆萨染色和柯兹洛夫斯基染色镜检以及AMOS-PCR诊断试剂盒进行了初步鉴定。结果显示,在改进的布鲁氏菌选择性培养基上分离出了特异的菌落：H2O2试验有气泡产生,尿素酶氧化试验培养基颜色由黄色变为紫色,生化鉴定结果为阳性,姬姆萨染色和柯兹洛夫斯基染色镜检可见清晰的球杆形菌体,AMOS-PCR显示有180bp和880bp两条清晰带,以上结果初步证明所分离的菌体为布鲁氏菌。根据GenBank中的发表的布鲁氏菌bp26基因,设计合成1对特异性引物,以提取的分离株布鲁氏菌的总DNA为模板PCR扩增得到了bp26基因,克隆到pMD18-T载体上,亚克隆到pGEX-4T-1原核表达载体上,构建pGEX-4T-bp26重组表达载体,将PCR和酶切鉴定正确的重组表达载体转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,表达出试验所预期大小的融合蛋白。SDS-PAGE分析和Western blotting检测结果显示,表达的蛋白大小约为53KDa,该蛋白具有较好的反应原性。本试验为进一少以该蛋白为抗原建立ELISA诊断方法,以及以此蛋白为基础研制疫苗提供了理论依据和试验基础。