论文部分内容阅读
外阴慢性单纯性苔藓（Vulvar lichen simplex chronicus,LSC）属于外阴色素减退性疾病,其病因及发病率至今尚不明确,主要继发于各种外阴瘙痒类的疾病。LSC的病理特征为外阴皮肤表层鳞状上皮增生伴过度角化或角化不全,真皮浅层胶原纤维均质化。目前,临床常用的治疗方法包括药物治疗和物理治疗。常规药物治疗如局部涂抹类固醇类药物,治疗过程漫长且易反复发作且患者耐受性较差。物理治疗如:CO2激光治疗,冷冻治疗和波姆光治疗等,虽然在一定程度上有效,但复发率较高。聚焦超声治疗是近年来广泛应用于治疗外阴色素减退性疾病的一种物理治疗手段,与药物治疗和其它物理治疗方法相比,聚焦超声治疗外阴色素减退性疾病具有有效性好、安全性高和复发率低等优势,患者治疗后满意度较高。聚焦超声治疗外阴慢性单纯性苔藓疗效显著,但关于其治疗外阴疾病的机制却罕有研究,因此本实验拟从病理检测、电子显微结构检测、蛋白检测及mRNA检测等检测手段切入,对聚焦超声治疗外阴慢性单纯性苔藓的分子机制进行深入探讨。目的1.外阴慢性单纯性苔藓（Vulvar lichen simplex chronicus）动物模型的建立。2.聚焦超声治疗外阴慢性单纯性苔藓可能的作用机制,通过检测聚焦超声对外阴慢性单纯性苔藓动物模型外阴皮肤中notch1、c-fos及转化生长因子β3（Transforming growth factor-β3,TGF-β3）表达的影响进行探究。方法本实验的研究步骤分为:第一部分:外阴慢性单纯性苔藓动物模型的建立;第二部分:探究聚焦超声治疗外阴慢性单纯性苔藓SD大鼠模型的疗效及作用机制。1.本实验所用全部SD大鼠（雌性,SPF级,80只）均由重庆医科大学动物实验中心提供,共分成2个组,空白对照组（n=10）,整个实验过程中不给予任何实验处理;模型组（n=70）,外阴皮肤机械刺激联合涂抹0.5%二甲基苯并蒽（DMBA）丙酮溶液。实验处理周期为12周,各组相应实验处理于每周一、三、五固定时间进行;整个实验观察周期为20周。肉眼观察外阴皮肤动态变化情况,第8、12、16、20周对大鼠外阴皮肤组织进行活检,染色后显微镜下观察大鼠外阴皮肤组织的病理改变。2.模型建立成功的SD大鼠（n=56）随机分为治疗组（n=28）和对照组（n=28）,治疗组的大鼠采用聚焦超声治疗,对照组的大鼠采用聚焦超声假辐照治疗（治疗过程中仪器无功率输出）。两组大鼠治疗结束后的第4周,对其外阴皮肤行组织病理学检查、masson胶原纤维染色、透射电镜观察,免疫组织化学法（Immunohistochemistry）和免疫印迹法（Western blotting）检测,通过以上检测观察notch1、c-fos及TGF-β3蛋白表达的变化。结果1.空白对照组大鼠各个时期外阴组织病理学无明显变化。第12周,80%（56/70）的模型组大鼠出现了外阴慢性单纯性苔藓（Lichen simplex chronicus,LSC）改变。2.聚焦超声治疗后4周,治疗组75.0%（21/28）实验大鼠外阴皮肤恢复正常,17.8%（5/28）大鼠继续进展为LSIL,7.2%（2/28）大鼠仍为LSC。经聚焦超声假辐照治疗的对照组中有67.9%（19/28）大鼠会继续进展为外阴低级别鳞状上皮内瘤变（LSIL）,21.4%（6/28）大鼠仍然表现为LSC,而只有10.7%（3/28）大鼠恢复正常,两组间治愈率差异有统计学意义（P<0.05）。治疗组masson染色后发现其真皮层胶原纤维密度明显低于对照组（P<0.05）,与空白对照组差异较小（P>0.05）;治疗组大鼠外阴皮肤中notch1及c-fos蛋白的表达均明显低于对照组（P<0.05）,TGF-β3蛋白表达高于对照组,以上治疗组蛋白表达均与空白对照组差异较小（P>0.05）。结论1.采用0.5%DMBA丙酮溶液涂抹大鼠外阴,同时联合单纯机械刺激的方法可以成功诱导雌性大鼠产生外阴慢性单纯性苔藓病变。2.聚焦超声治疗外阴慢性单纯性苔藓疗效显著,且治疗后的复发率较低,这可能与聚焦超声治疗影响了大鼠外阴皮肤中notch1、c-fos及TGF-β3蛋白的表达,从而抑制大鼠外阴皮肤组织纤维化的进程相关。