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目的: 慢性肾功能衰竭(chronic renal failure，CRF)是各种原因引起的肾脏损害和进行性恶化的结果，常见于慢性肾小球肾炎、肾小管间质性肾炎及糖尿病、高血压病、风湿病血管炎性肾损害等原发性、继发性疾病中。大黄蟅虫丸是《金匮要略》中治疗虚劳的方剂，主要由水蛭、虻虫等组成，具有活血化瘀通络的功能，临床中用其防治慢性肾功能衰竭的进展。为明确其作用机理，本研究通过腺嘌呤灌胃复制慢性肾功能衰竭大鼠模型，并进一步观察大黄蟅虫丸对该模型的影响。 方法: 第一部分 腺嘌呤诱导大鼠慢性肾功能衰竭模型的改良 健康雄性SD大鼠25只，体重203±15g。随机分为正常组10只、模型组15只。模型组用含量为98.0％腺嘌呤混悬液灌胃（剂量为100mg/kg.d、150mg/kg.d、200mg/kg.d，依次各一周），正常组给予等量的蒸馏水，两组在同等条件下饲养。第21天处死动物，股动脉取血检测:血清总蛋白(TP)、血肌酐(CRE)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TCH)、甘油三脂(TG):取部分新鲜肾组织用10％福尔马林固定，脱水、透明、石腊包埋、切片(3um)，分别行HE、PAS染色，光镜下观察其病理改变:取部分新鲜肾组织用6％冷戊二醛固定，JEM-1200EX型透射电镜下观察超微结构变化。 第二部分 大黄蟅虫丸对腺嘌呤肾衰大鼠生化及病理形态学的影响 健康雄性SD大鼠50只，体重203±15g。随机分为正常组、模型组、中药组（大黄蟅虫丸组）、西药组（依那普利组）。造模方法同第一部分，在造模的同时开始给药（大黄蟅虫丸、依那普利的剂量为人体每公斤体重用量的10倍），第21天处死动物，股动脉采血行生化检测和病理形态学观察，检测内容同第一部分:同时参照SOD、MDA试剂盒用自动生化分析仪测定大鼠血清的SOD、MDA含量，SOD测定方法为羟胺法（比色法），MDA测定方法为LPO法（比色法）。 第三部分 大黄蟅虫丸对腺嘌呤肾衰大鼠血NO、NOS的影响 实验动物及分组同第二部分，在实验结束时，大鼠股动脉取血检测NO、NOS的含量。血NO、NOS的检测采用比色法。 第四部分 大黄蟅虫丸对腺嘌呤肾衰大鼠肾纤维化因子的影响 实验动物及分组同第二部分，实验结束时，应用免疫组织化学（SABC法）方法检测TGF-β1蛋白质的表达，应用原位杂交技术检测TGF-β1mRNA的表达，并用病理图像分析系统对免疫组化和原位杂交系统结果进行半定量分析。 结果: 第一部分 1.各组大鼠体重、肾重和肾重指数以及生化指标的检测结果 通过腺嘌呤灌胃导致大鼠慢性肾功能衰竭，结果发现模型组大鼠肾重、肾重指数明显大于正常组(P＜0.01)，而体重则明显低于正常组(P＜0.01)。模型组大鼠表现为大量的蛋白尿和严重的肾功能损害，同时伴见血浆总蛋白的降低和胆固醇、甘油三酯的增高，与正常组相比，均有显著性差异(P＜0.01)。 2.各组大鼠肾组织病理形态学观察 2.1 光镜观察 正常组肾小球形态规则，包曼氏囊腔均一，毛细血管腔分布均匀无变形，管腔内偶见红细胞，基底膜无增厚，系膜区无增宽:肾小管排列整齐，管壁细胞匀整:基底膜完整:肾间质无水肿、炎细胞浸润等异常反应。模型组大部分肾小球代偿性肥大，部分肾小球体积缩小，包曼氏囊腔狭窄，基膜部分断裂、粘连。系膜区增宽，大部分毛细血管腔变形、消失，病变受累＞80％;小管排列紊乱，管腔重度变形，基底膜增厚，细胞崩解，形态不清;间质局部水肿，部分纤维增生明显，淋巴细胞浸润。 2.2 电镜观察 正常组肾小球毛细血管基底膜完整，密度均匀，足突排列清晰，无融合及紊乱现象，内皮细胞窗孔清晰可见。模型组基底膜增厚明显，密度不均匀或有断裂处，足突广泛融合，足突外有假绒毛样变性，间质有单核细胞浸润。 第二部分 1.各组大鼠体重、肾重和肾重指数的检测结果 模型组大鼠肾重、肾重指数明显大于正常组(P＜0.01)，而体重则明显低于正常组(P＜0.01)。与模型组相比，中药组和西药组大鼠的体重均明显增加(P＜0.01)，肾重指数均明显降低(P＜0.01)，说明两组药物均能改善肾衰大鼠的生长状况。中药组和西药组相比，有显著性差异(P＜0.05)。 2.各组大鼠血、尿生化指标的检测结果 模型组大鼠表现为大量的蛋白尿，与正常组相比，有显著性差异(P＜0.01)。两治疗组与模型组相比，尿蛋白均有不同程度的降低(P＜0.01;P＜0.05)，中药组优于西药组(P＜0.05)。 模型组血肌酐、尿素氮明显升高，与正常组相比有显著性差异(P＜0.01)。两治疗组与模型组相比，血肌酐和尿素氮均明显下降(P＜0.01，P＜0.05)。其中中药组尿素氮的下降程度明显低于西药组(P＜0.05)。模型组血清TP明显降低，TCH和TG明显升高，与正常组比较有显著性差异(P＜0.01):中药组与西药组相比，血清TP显著升高(P＜0.01)，TCH和TG显著降低(P＜0.01)。 3.各组大鼠血清SOD和MDA的检测结果 模型组大鼠与正常组相比表现为T-SOD和CuZn-SOD活性降低，MDA含量增高(P＜0.05，P＜0.01)。两治疗组与模型组相比，T-SOD活性增高(P＜0.01，P＜0.05)，CuZn-SOD活性增高(P＜0.01，P＜0.05)，MDA含量均明显下降(P＜0.01，P＜0.01)。 4.各组大鼠肾组织病理形态学观察 4.1 光镜观察 正常组和模型组的病理改变同第一部分。中药组肾小球轻度肿胀，系膜区增宽，毛细血管球萎缩，呈分叶状态，毛细血管腔在萎缩的肾小叶中有变形:肾小管排列整齐，管腔略薄，个别管腔扩大:间质有少量细胞浸润。西药组肾小球形态欠规整，包曼氏囊扩大，系膜区增宽，毛细血管腔变形:肾小管部分破坏，肾小管壁变薄、扩大变形:间质淋巴细胞浸润。 4.2 电镜观察 正常组和模型组的病理改变同第一部分。中药组肾小球毛细血管基底膜轻度增厚，密度不均匀，足突有紊乱、融合现象:小管细胞内线粒体较完整。西药组基底膜增厚比模型组轻，基底膜密度不均匀，足突有破坏及融合现象。 第三部分 腺嘌呤肾功能衰竭大鼠，血清NO、NOS明显下降，与正常组相比有显著性差异(P＜0.01)，表明CRF大鼠体内存在着NO及NOS的代谢紊乱。两治疗组与模型组相比，NO、NOS含量显著升高(P＜0.01)，其中中药组的NO、NOS含量显著高于西药组(P＜0.05)。 第四部分 1.免疫组化结果 1.1 TGF-β1的表达及分布 正常组在肾小球部分区域的系膜区、基膜区及肾小囊上皮细胞有少量表达，远曲小管上皮细胞亦有少量表达:模型组与正常组相比，肾小球系膜区、基膜区和上皮细胞以及肾小囊上皮均呈大量表达，远曲小管上皮细胞表达亦明显增多，近曲小管、间质也有表达。两治疗组与模型组比较，表达部位基本相同，但表达的区域明显缩小，表达的强度亦显著降低。 1.2 TGF-β1的免疫组化半定量分析结果 模型组与正常组相比，TGF-β1的相对含量呈显著性升高(P＜0.01):两治疗组与模型组相比，TGF-β1的相对含量显著性降低(P＜0.01)，提示两组药物均可抑制肾组织中TGF-β1的蛋白表达。 2.原位杂交结果 正常组TGF-β1mRNA在肾小球及肾小管内均有微量表达。模型组与正常组相比，TGF-β1mRNA在肾小球内有大量表达(P＜0.01)。两治疗组与模型组相比，肾小球仅有少量的TGF-β1mRNA表达，且表达强度弱于模型组(P＜0.01，P＜0.05)。 结论： 1.采用腺嘌呤梯度灌胃方法制作慢性肾功能衰竭动物模型，造模成功时间为21天。本方法造模药量容易掌握，用药均衡。 2.大黄蟅虫丸对慢性肾功能衰竭的治疗有确切疗效。 3.大黄蟅虫丸能够降低慢性肾衰大鼠尿蛋白和血脂以及BUN、CRE的水平，提高血浆蛋白的含量，改善肾衰大鼠的生存质量，阻止慢性肾功能衰竭病情的发展。 4.大黄蟅虫丸能够阻止或改善慢性肾衰大鼠肾组织的病理损害。 5.大黄蟅虫丸能够提高肾衰大鼠机体的抗氧化能力，纠正慢性肾衰大鼠NO、NOS的合成及分泌不足，这可能是该方阻止肾功能衰竭进一步发展的部分作用机制。 6.大黄蟅虫丸能够抑制TGF-β1蛋白及其mRNA的表达，同时又可抑制PAI-1、TIMP-1蛋白及其mRNA的表达，提示该方可以纠正肾衰大鼠肾组织中细胞外基质合成增多、降解减少的失衡状态，从而阻止或延缓肾脏纤维化的进程。