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研究背景：
心肌细胞肥大和血管平滑肌细胞增殖是引起心血管疾病发生率和死亡率显著升高的危险因素，是心肌梗塞及高血压等临床常见疾病的一种并发症。因此，如何预防和逆转心脏重构和血管平滑肌细胞增殖是改善许多心血管疾病预后的重要措施。
血管紧张素-(1-7)[Ang-(1-7)]在体内由血管紧张素Ⅰ(AngⅠ)或AngⅡ经转化而成。近年细胞培养和离体研究表明，它可通过一种特异性受体-Mas受体，介导许多与AngⅡ相拮抗的生理作用。在改善心肌细胞肥大、抑制成纤维细胞和平滑肌细胞增殖、调节水盐平衡以及降血压等方面发挥重要的作用。
但是，Ang-(1-7)是一种肽类活性物质，不能耐受胃肠道蛋白水解酶从而限制其临床应用。近年开发出的非肽性、具有可口服特性的Ang-(1-7)受体类似物AVE0991虽然被证实是Ang-(1-7)Mas受体的激动剂，并已在一些器官上证实具有与Ang-(1-7)高度相似的机体保护作用，但其对心肌肥大、成纤维细胞和血管平滑肌细胞的增殖的影响及其作用机理尚未明了。
TGF-β1/Smads调节多种细胞的增殖、分化、迁移、凋亡和细胞外基质的生成，是心室重塑过程中的中心环节。Smad蛋白家族是TGF-β超家族细胞内信号转导过程中极为重要的介导分子，TGF-β1与细胞表面的特异性受体结合并磷酸化Smads蛋白后，被激活的Smad蛋白转入细胞核内调节相关基因的转录而产生多种生物学效应。但是，TGF-β1/Smads通路是否介导了AVE0991抑制心肌细胞肥大和细胞增殖，有待进一步探讨。
血红素氧合酶-1(HO-1)是血红素氧合酶的同工酶之一，HO-1在体外和体内实验中均被证实能抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌肥大的进展，能调节AngⅡ所致的心血管重构过程，但非肽性化合物AVE0991是否也通过该通路抑制心肌细胞肥大和细胞增殖尚不清楚。
研究表明p38MAPK及其上游MMK3/6激酶激活能导致心肌肥大，p38激酶抑制剂SB203508或SB202190能抑制激动剂诱发的心肌肥大。在细胞培养条件下，心肌细胞腺病毒转染活MMK6具有显著的促心肌肥大作用，MMK3、p38α或p38β缺失转染则抑制心肌肥大形成。表明p38MAPK在抑制心肌肥大中发挥重要的作用，但AVE0991是否通过p38抑制心肌细胞肥大和细胞增殖尚无文献报道。
研究目的：
1.非肽性化合物AVE0991是否能抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大和血管平滑肌细胞增殖。
2.非肽性化合物AVE0991是否通过Mas/TGF-β1/Smads，Mas/p38和Mas/HO-1信号转导通路发挥以上效应。
第一部分AVE0991对AngⅡ诱导的心肌细胞肥大的影响
实验方法：
1.新生原代大鼠心肌细胞培养。
2.实验分组：细胞培养48h后，换无血清培养液，再培养24h后，按以下分组加入不同干扰因素进行实验：1)对照组(无血清组)，2)AngⅡ组(10-6mol/L)，3)AVE0991组(10-5mol/L)，4)A-779组(10-6mol/L)，5)AngⅡ+AVE0991高浓度组(浓度分别为10-6mol/L、10-5 mol/L，即“AVE0991-H组”)，6)AngⅡ+AVE0991+A-779组(浓度分别为10-6mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L；在该组中，心肌细胞先予A-779预处理半小时)，7)AngⅡ+AVE0991低浓度组(浓度分别为10-6mol/L，10-7mol/L，即“AVE0991-L组”)。通过测定心肌细胞蛋白质合成速率、蛋白质含量和细胞表面积等指标，观察心肌细胞肥大情况；并利用Western blot测定AVE0991对信号通路TGF-β1/Smad2、p38的影响。另外，为进一步明确其信号传导通路，进行以下实验：1)对照组(无血清组)，2)AngⅡ组(10-6mol/L)，3)AngⅡ+AVE0991高浓度组(浓度分别为10-6 mol/L、10-5mol/L，即“AVE0991-H组”)，4)AngⅡ+AVE0991+A-779组(浓度分别为10-6mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L；在该组中，心肌细胞先予A-779预处理半小时)，5)AngⅡ+AVE0991+SB203580(p38拮抗剂)组(浓度分别为10-6mol/L，10-5mol/L，10-5mol/L”)。各实验数据以均数±标准差表示。用spss11.0统计软件，以方差分析统计均数差异和LSD分析各组之间的差异，P＜0.05为有统计学差异。
结论：
1.非肽性化合物AVE0991能明显抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大，并呈剂量依赖性。
2.非肽性化合物AVE0991可能通过Mas/p38/TGF-β1通路抑制AngⅡ诱导的心肌细胞肥大。
第二部分AVE0991对AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
实验方法：
1.家兔血管平滑肌细胞培养。
2.实验分组：取第三代血管平滑肌细胞(VSMCs)，换无血清培养液，再培养24h后，按以下分组加入不同干扰因素进行实验：1)对照组(无血清组)，2)AngⅡ组(10-6mol/L)，3)AVE0991组(10-5mol/L)，4)A-779组(10-6mol/L)，5)AngⅡ+AVE0991高浓度组(浓度分别为10-6 mol/L、10-5mol/L，即“AVE0991-H组”)，6)AngⅡ+AVE0991+A-779组(浓度分别为10-6mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L；在该组中，VSMCs先予A-779预处理半小时)，7)AngⅡ+AVE0991低浓度组(浓度分别为10-6mol/L，10-7mol/L，即“AVE0991-L组”)。通过测定VSMCs的DNA合成速率观察血管平滑肌细胞增殖的情况；并利用Western blot测定AVE0991对信号通路p38、HO-1的影响。另外，为进一步明确其信号传导通路，进行以下实验：1)对照组(无血清组)，2)AngⅡ组(10-6mol/L)，3)AngⅡ+AVE0991高浓度组(浓度分别为10-6mol/L、10-5mol/L，即“AVE0991-H组”)，4)AngⅡ+AVE0991+A-779组(浓度分别为10-6mol/L、10-5mol/L、10-6mol/L;在该组中，心肌细胞先予A-779预处理半小时)，5)AngⅡ+AVE0991+ZnPPⅨ(HO-1抑制剂)组(浓度分别为10-6mol/L，10-5mol/L，10-6mol/L”)。各实验数据以均数±标准差表示。用spss11.0统计软件，以方差分析统计均数差异和LSD分析各组之间的差异，P＜0.05为有统计学差异。
结论：
1.非肽性化合物AVE0991能明显抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖，并呈剂量依赖性。
2.非肽性化合物AVE0991可能通过Mas/HO-1/p38通路抑制AngⅡ诱导的血管平滑肌细胞增殖.