【摘 要】
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本试验通过对PCR方法鉴别奶牛胚胎性别相关环节的优化研究，进一步弥补该方法原有的不足之处，为奶牛胚胎性别鉴别技术尽快应用于商品化生产提供了有价值的参数。试验中主要针对P
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本试验通过对PCR方法鉴别奶牛胚胎性别相关环节的优化研究，进一步弥补该方法原有的不足之处，为奶牛胚胎性别鉴别技术尽快应用于商品化生产提供了有价值的参数。试验中主要针对PCR法鉴别奶牛胚胎性别技术的四个重要环节进行了优化处理。 首先，采用多重PCR方法扩增牛Y-染色体多重复序列和牛常染色体DNA片段进行奶牛胚胎性别鉴别，这样就可以避免因两个目的片段拷贝数不同而产生的不均等扩增。本试验共鉴别30枚胚胎，其中新鲜胚胎21枚、冷冻胚胎9枚。两次性别鉴别结果的相符合率为100％。 其次，筛选种属特异性好，扩增灵敏度高的引物对奶牛Y-染色体多重复序列进行扩增。试验中有三对候选引物st1／st2、BOV97M、K49057／K49058，经过多次试验筛选，最后选定st1／st2作为性别鉴别试验的引物。 再次，确定性别鉴别胚胎的最佳取样细胞数，改进胚胎切割方法，缩短胚胎切割时间。试验选择体内受精生产的发育级别为A级和B级的桑椹胚，使用玻璃切割针进行切割。经过预试验，确定取样细胞数在5-10个为最好，这样既不影响PCR的精确度又对胚胎的损伤小。 最后，本试验还进行了单细胞PCR的尝试，试验结果说明，改进后的性别鉴别PCR反应体系可对单个细胞进行有效扩增。
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